[發明專利]一種適用于地西泮殘留分析的酶聯免疫檢測試劑盒

無效

• 申請號: 200810022159.8
• 申請日: 2008-06-30
• 公開（公告）號: CN101315374A
• 公開（公告）日: 2008-12-03
• 發明（設計）人: 胥傳來;李秋生;劉麗強;袁緩;彭池方;胡擁明
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所
• 代理人: 時旭丹;劉品超

技術領域

本發明涉及一種適用于地西泮(DZP)殘留分析的酶聯免疫檢測試劑盒，屬于酶聯免疫吸附分析(ELISA)試劑盒技術領域。

背景技術

地西泮(Diazepam)為苯二氮卓類鎮靜安眠藥，化學名稱為：1-甲基-5-苯基-7-氯-1，3-二氫-2H-1，4-苯并二氮卓-2-酮。曾用作動物飼料添加劑，作為生長促進劑，具有使動物嗜睡少動，生長快且有改變肉質的作用。也用在屠宰和動物檢疫之前，或將動物轉移屠宰之前，起鎮靜作用，以減輕動物緊張狀態，降低動物傷害和死亡率。此類藥物常見嗜睡，可見無力、頭痛、暈眩、惡心、便秘，偶見皮疹、肝損害、骨髓抑制等不良反應。若隨意在飼料中添加此類藥物，蓄積的藥物通過食物鏈進入人體，將造成巨大的危害。為此許多國家將此類藥物列入禁用藥物名單。目前，國內外有關地西泮的檢測主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、薄層色譜法(TLC)、氣-質聯用法(GC-MS)、液-質聯用法(LC-MS)等，但這些方法不僅需要昂貴的儀器設備，對檢材的要求也比較高，需要進一步的提純處理才能進行，這已經不能達到現代檢測對快速、方便、準確的要求。近年來，國外已經開展了對苯二氮卓類免疫分析方法的研究，但國內在這方面的研究起步較晚，大部分的檢測產品還需要依賴國外進口。為了加強對國內肉制品的監督力度和保障人民的身體健康，有必要展開對苯二氮卓類免疫分析方法的研究，有必要建立一種快速有效的地西泮的酶聯免疫吸附檢測方法。

發明內容

(一)要解決的技術問題

本發明的目的在于提供一種具有高靈敏度、高特異性、高準確度、高精確度、操作方法簡單的酶聯免疫吸附檢測試劑盒，用于地西泮殘留的批量、快速檢測。

(二)技術方案

為實現上述目的，本發明提供了一種地西泮殘留分析的酶聯免疫檢測試劑盒，該試劑盒包括包被了地西泮包被抗原的酶標板、海綿支架、地西泮標準品、地西泮多克隆抗體、酶標二抗、濃縮洗滌液、顯色液和反應終止液。

其中，包被了地西泮包被抗原的酶標板的制備過程中，所用的包被原是地西泮的半抗原3-半琥珀酸酯地西泮與卵清蛋白(OVA)的偶聯復合物，所用包被液是0.05?M?pH?9.6碳酸鈉緩沖液，所用封閉液是含2％OVA的上述包被液。

其中，地西泮多克隆抗體是用3-半琥珀酸酯地西泮與牛血清白蛋白(BSA)的偶聯復合物常規方法免疫制備。

其中，酶標二抗是辣根過氧化物酶標記羊抗兔抗體。

其中，濃縮洗滌液(PBST)的配方為20mL蒸餾水中加入8g氯化鈉，0.2g磷酸二氫鉀，3g磷酸氫二鈉，0.4g氯化鉀，0.5mL吐溫-20，濃縮洗滌液的濃度是正常使用時的50倍。

其中，顯色液包括A液和B液，A液配方為每100mL水中加入0.933g檸檬酸，3.68g?Na₂HPO₄·12H₂O和18μL30％H₂O₂；B液配方為60mg四甲基聯苯胺溶于100mL乙二醇，使用時按A∶B＝5∶1的比例使用。

本發明試劑盒的檢測分析原理是：酶標板上的每個孔均包被有相同量的地西泮抗原，加入待測地西泮樣品和地西泮多克隆抗體后，固相包被抗原和待測地西泮相互競爭與多克隆抗體反應，由于每個孔中的固相抗原和加入的多克隆抗體含量均一致，所以當待測樣品的地西泮濃度高時，則被結合在固相抗原上的多克隆抗體少，加入的酶標二抗與被固定抗體結合量少，用洗滌液洗滌后加入底物液(即顯色液A液)和顯色液(即B液)，顯色反應淺，用酶標儀檢測的吸光值低，表明抑制率高；反之，當待測樣品的地西泮濃度低時，則所測的吸光值高，抑制率低。根據用已知的地西泮濃度檢測所作的標準曲線，可以推算出待測樣品的地西泮的濃度。

(三)有益效果

本發明提供的地西泮殘留檢測試劑盒采用了地西泮多克隆抗體，能準確靈敏地檢測尿液、組織中地西泮及其他結構相似的苯二氮卓類殘留，樣品的前處理過程簡單，耗時少，能同時檢測大量的樣品，樣品檢測成本遠低于傳統的儀器檢測方法，而且本發明試劑保存時間長，無放射性污染。本發明對解決大批量樣品的地西泮殘留現場監控技術具有重要的現實意義。

附圖說明

圖1地西泮的標準抑制曲線。

具體實施方式

以下是實施例用于對本發明的進一步說明，但不用來限制本發明所要保護的范圍。

實施例1試劑盒操作及結果計算：