[發(fā)明專利]一種豬血卟啉鐵及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810021796.3
• 申請日: 2008-08-13
• 公開（公告）號: CN101337964A
• 公開（公告）日: 2009-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范遠(yuǎn)景;姬瑩瑩;馮銓祥;余麗明;劉盛揚(yáng);陳嘉可;鄭琛;龐偉
• 申請（專利權(quán)）人: 合肥工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07D487/22
• 分類號: C07D487/22;C07F15/02;C12P17/18;C12P9/00
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 吳啟運(yùn)

一、技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種營養(yǎng)保健品及其制備方法，特別涉及一種補(bǔ)鐵劑及其制備方法，具體地說是在一種豬血卟啉鐵及其制備方法。

二、背景技術(shù)

目前常用的補(bǔ)鐵劑為非卟啉鐵，如硫酸亞鐵，為無機(jī)元素鐵，人體吸收率低，并有一定的副作用。市場上用豬血做原料生產(chǎn)的產(chǎn)品含鐵量僅1.4％，以有機(jī)鐵血紅素形式存在的鐵更是微乎其微，絕大部分鐵還是以元素鐵的形式存在，人體吸收利用率比較低。從紅血球中提取的卟啉鐵，無毒無害，一般不受膳食因素影響，可望取代目前常用的補(bǔ)鐵劑，但是，作為一種補(bǔ)鐵藥物，實(shí)際提取出來的卟啉鐵難溶于水，嚴(yán)重影響了其吸收和利用。國內(nèi)外一些學(xué)者、專家企圖通過不同的卟啉鐵提取方法提高卟啉鐵的溶解度，但是，存在工藝流程、成本、產(chǎn)品純度、得率和溶解度等問題，尤其是卟啉鐵的溶解度問題一直沒有獲得突破性進(jìn)展。

三、發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種豬血卟啉鐵補(bǔ)鐵劑及相應(yīng)的制備方法，所要解決的技術(shù)問題是提高豬血卟啉鐵的溶解度。

本發(fā)明所稱的豬血卟啉鐵是自新鮮豬血中分離、提取并修飾得到的卟啉鐵，本卟啉鐵有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)式：

本豬卟啉鐵的制備方法，以新鮮豬血為原料，首先分離除去血清提取血紅蛋白，然后超聲破壁，與現(xiàn)有技術(shù)的區(qū)別是對血紅蛋白破壁后進(jìn)行酶解以及酶解后的酸性丙酮法分離提取卟啉鐵。

所述的酶解是向破壁后的血紅蛋白中加入蛋白酶于28～38℃條件下酶解7～10小時得到酶解液，蛋白酶的加入量以底物紅血球計(jì)為7500～8500U/g；所述的蛋白酶選自胰蛋白酶或胃蛋白酶或堿性蛋白酶或中性蛋白酶。

優(yōu)選30～36℃條件下酶解8小時，酶加入量以底物紅血球計(jì)為8000U/g。

所述的酸性丙酮分離提取法是向酶解液中加入4～6倍體積的丙酮，并調(diào)pH至2.5～3.5，攪拌均勻，離心分離，收集上清液血紅素丙酮溶液；向血紅素丙酮溶液中加入濃度為1.0％～5.0％(w/w)的醋酸鈉溶液，使混合液pH至6.5～7.5，攪拌均勻后靜置、結(jié)晶沉淀，待結(jié)晶完全后分離，結(jié)晶即是豬血卟啉鐵。最后用蒸餾水洗滌、干燥。

紅血球是一種血紅蛋白，所以選擇蛋白酶進(jìn)行酶解修飾。所謂修飾就是使血紅蛋白的氨基酸序列中疏水性氨基酸所占的比例小于親水性氨基酸以提高其溶解度。表1、圖1給出了四種蛋白酶單因素酶解時間對卟啉鐵吸光度影響的試驗(yàn)結(jié)果。

表1單因素酶解時間對卟啉鐵吸光度影響

表1結(jié)果顯示，4種單因素酶解在卟啉鐵吸光度最高值均超過了原藥(氯化血紅素)的1.041，也就是說，經(jīng)過酶解后卟啉鐵溶解度有了一定的提高。圖1顯示：在酶解8小時前吸光度逐漸上升，8小時左右吸光度達(dá)到峰值，之后逐漸下降。酶解24小時左右，4個吸光度都小于1.041，但比較接近。而在這其中，尤以堿性蛋白酶提高最為顯著，8小時左右其吸光度達(dá)到了1.711。所以優(yōu)選堿性蛋白酶進(jìn)行酶解修飾。

本方法每1L新鮮豬血可得到3.12g卟啉鐵，本卟啉鐵溶解度較標(biāo)準(zhǔn)品提高了65.5％，鐵含量為9.1％。可望取代目前常用的補(bǔ)鐵劑。

四、附圖說明

圖1：四種蛋白酶單因素酶解時間對卟啉鐵吸光度影響曲線。

圖2：本豬血卟啉鐵的紅外光譜圖。圖中在1000cm^-1左右處的峰值增強(qiáng)，說明卟啉環(huán)上的N原子與金屬鐵進(jìn)行了配位。

圖3是標(biāo)準(zhǔn)品卟啉鐵的溶解度曲線。

五、具體實(shí)施方式

1、自新鮮豬血中提取分離紅血球

采集新鮮豬血，加入濃度為0.38％(w/w)的檸檬酸三鈉作為抗凝劑，加入量為豬血量的4％(v/v)，4000r/min轉(zhuǎn)速離心分離15min，收集紅血球，經(jīng)超聲破壁后加入氯仿，加入量為紅細(xì)胞量的0.15倍(v/v)，4000r/min轉(zhuǎn)速離心分離15min，收集上層血紅蛋白溶液，4℃冷藏備用。

2、酶解

取冷藏備用的血紅蛋白溶液，加入堿性蛋白酶于35℃條件下酶解9小時得到酶解液，酶加入量以血紅蛋白計(jì)為8000U/g。

3、后處理

向酶解液中加入丙酮，并用醋酸調(diào)pH至3.0，丙酮加入量為紅細(xì)胞量的4～6倍(v/v)，攪拌均勻后4000r/min轉(zhuǎn)速離心分離10min，收集上清液即血紅素丙酮溶液；向血紅素丙酮溶液中加入濃度為3％(w/w)的醋酸鈉溶液，使混合液pH至7.0，攪拌均勻后靜置、結(jié)晶，待結(jié)晶沉淀完全后離心分離，收集沉淀即是豬血卟啉鐵粗品，用去離子水和無水乙醇依次洗滌沉淀，真空干燥，得到經(jīng)酶修飾的豬血卟啉鐵。