[發(fā)明專利]多孔的保留有生物活性因子的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)及制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810020808.0
• 申請(qǐng)日: 2008-08-01
• 公開（公告）號(hào): CN101327338A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊斌;孫則禹;周六化;戴玉田
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61L27/36
• 分類號(hào): A61L27/36;A61L27/56
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 樓高潮

1.一種多孔的保留有生物活性因子的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)，其特征在于：

a)所述的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)不含細(xì)胞、無(wú)尿路上皮層、無(wú)粘膜下層、無(wú)血管系 統(tǒng)；

b)上述的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)具有良好的生物相容性；

c)上述的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)中保留有生物活性因子，為促進(jìn)細(xì)胞黏附的黏附因 子、促進(jìn)細(xì)胞增殖的生長(zhǎng)因子和促進(jìn)細(xì)胞遷移的趨化因子；

d)上述的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)的超微結(jié)構(gòu)特征：厚度為0.5-3.0mm，孔徑大小 60-250μm，孔隙率80-90％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)，其特征在于所述的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì) 來(lái)自下列動(dòng)物的膀胱：豬、兔、狗或牛。

3.一種制備權(quán)利要求1所述的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)的方法，其特征在于制備步驟如 下：

a)將動(dòng)物的正常膀胱和部分尿道置于緩沖液中，迅速帶到實(shí)驗(yàn)室后仔細(xì)去除 外表面的脂肪和漿膜組織，經(jīng)尿道插入輸液皮條導(dǎo)管并將其用絲線固定在尿道上，然 后經(jīng)此輸液皮條導(dǎo)管用緩沖液沖洗膀胱，將膀胱腔內(nèi)的尿液沖洗干凈；

b)經(jīng)輸液皮條導(dǎo)管向膀胱腔內(nèi)灌入含0.25％/0.038％的胰蛋白酶/乙二胺四乙 酸四鈉的消化液，夾閉輸液皮條導(dǎo)管，再將整個(gè)膀胱完全浸入此消化液中，室溫中振 蕩消化，然后倒出此消化液；

c)再經(jīng)輸液皮條導(dǎo)管用緩沖液沖洗，然后倒出此緩沖液；

d)再經(jīng)輸液皮條導(dǎo)管向膀胱腔內(nèi)灌入低滲緩沖液，夾閉輸液皮條導(dǎo)管，再將 整個(gè)膀胱完全浸入此低滲緩沖液中，靜置過(guò)夜，然后倒出此低滲緩沖液；

e)再經(jīng)輸液皮條導(dǎo)管用緩沖液沖洗，然后倒出此緩沖液；

f)再經(jīng)輸液皮條導(dǎo)管向膀胱腔內(nèi)灌入含表面活性劑曲拉通X-100的高滲緩沖 液，夾閉輸液皮條導(dǎo)管，再將整個(gè)膀胱完全浸入此含表面活性劑曲拉通X-100的高滲 緩沖液中，室溫中振蕩洗滌，然后倒出此含表面活性劑曲拉通X-100的高滲緩沖液；

g)再經(jīng)輸液皮條導(dǎo)管用緩沖液沖洗，然后倒出此緩沖液；

h)再經(jīng)輸液皮條導(dǎo)管向膀胱腔內(nèi)灌入含核酸酶的緩沖液，夾閉輸液皮條導(dǎo) 管，再將整個(gè)膀胱完全浸入此含核酸酶的緩沖液中，室溫中振蕩洗滌，然后倒出此含 核酸酶的緩沖液，得到膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)；

i)將上述的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)用緩沖液沖洗；

j)將上述的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)用去離子水沖洗；

k)將上述的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)置于深低溫冰箱中冷凍，再在冷凍干燥機(jī)中凍 干，得到凍干的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)；

l)將上述的凍干的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行滅菌，得到無(wú)菌的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)；

m)將上述的無(wú)菌的膀胱無(wú)細(xì)胞基質(zhì)低溫密封保存，備用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于在步驟a，c，e，g和i中所述 的緩沖液為4℃預(yù)冷的10mM磷酸鹽緩沖液，PH7.2-7.4，沖洗次數(shù)為3次。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于在步驟b中所述的含 0.25％/0.038％的胰蛋白酶/乙二胺四乙酸四鈉的消化液的PH為7.2-7.4灌入膀胱內(nèi)的 消化液的體積為30ml-500ml溶液，室溫中振蕩消化時(shí)間為0.5-4小時(shí)。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于在步驟d中所述的低滲緩沖液 為10mM三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液，PH?8.0，內(nèi)含5mM乙二胺四乙酸四鈉和10 KIU/ml抑肽酶；向膀胱腔內(nèi)灌入的低滲緩沖液體積為60-1200ml，靜置過(guò)夜的溫度為 4℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于在步驟f中所述的含表面活性劑 曲拉通X-100的高滲緩沖液，其中的表面活性劑曲拉通X-100的濃度為0.5-1.5％；其 中的高滲緩沖液為50mM三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液，PH?8.0，內(nèi)含0.5M氯化鈉， 10mM乙二胺四乙酸四鈉和10KIU/ml抑肽酶；向膀胱腔內(nèi)灌入的含表面活性劑曲拉 通X-100的高滲緩沖液體積為60-1200ml，室溫中振蕩洗滌時(shí)間為12-48小時(shí)。