[發明專利]快速鑒別周圍神經束性質的電化學檢測方法

無效

• 申請號: 200810020757.1
• 申請日: 2008-02-26
• 公開（公告）號: CN101246141A
• 公開（公告）日: 2008-08-20
• 發明（設計）人: 趙微;徐靜娟;陳洪淵;曹曉建
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: G01N27/416
• 分類號: G01N27/416;G01N27/327;C12Q1/46
• 代理公司: 南京知識律師事務所
• 代理人: 黃嘉棟

技術領域

本發明涉及周圍神經束性質的電化學鑒別方法。

背景技術

在周圍神經損傷后的神經修復中(如斷肢再植)，難點之一是手術中不能正確分辨出神經 干內運動束與感覺束，現有的縫合方法如神經外膜和神經束膜縫合法，由于不能實現兩斷端 相同神經束正確縫合，嚴重影響了患者的神經功能恢復，若能實現神經兩斷端感覺束對感覺 束。運動束對運動束的正確縫合，將極大提高神經功能恢復率。目前采用的酶組織化學法， 根據運動束和感覺束中一種神經遞質酶——乙酰膽堿酯酶的含量差別，作為鑒別運動束與感 覺束的標準。檢測乙酰膽堿酯酶主要為酶組織化學染色法，根據反應形成亞鐵氰化銅(一種 棕色沉淀)出現于酶活性部位，運動纖維呈強陽性，感覺纖維大部分呈陰性，少部分呈弱陽 性的原理，對神經束性質進行判定。然而此法染色時間長，過程復雜，且不能進行原位染色， 故臨床應用也受到一定限制。

近年來，電化學技術因其簡便快捷，準確靈敏及選擇性好等特點，在環境監測，食品工 業和臨床分析等領域受到了廣泛關注。在臨床生物化學檢驗領域，電化學技術已經成功應用 于代謝物，如葡萄糖和激素的測定，以及大分子，如細胞和蛋白質的檢測；而微型化電極在 電活性神經遞質的體外和在體檢測方面，也很有研究價值。在電化學家的努力下，檢測未知 生物樣品中的乙酰膽堿酯酶已經實現，實時監測也指日可待。由此可見，電化學技術與生命 科學的結合推動了電化學傳感器在臨床分析中的應用，并取得了不俗的進展。

目前，提高電化學傳感器性能的焦點集中在電極材料的選擇和表面修飾方面。很多先進 材料，如納米材料，高分子聚合物材料，因其具有特殊的物理化學性質，已被應用于電極的 制備和表面修飾，并在化學傳感器和納米器件的構建中展示了良好的應用前景。而表面科學 技術與電化學技術相結合制備成化學修飾電極，其潛在的應用價值也引起了科學界廣泛的研 究興趣，推進了近20年來電化學生物傳感器的迅速發展。

因此，將電化學技術與納米技術、表面科學相結合，制備高性能的電化學生物傳感器， 并將其應用于手術中快速鑒別周圍神經束性質，可提高周圍神經損傷修復后的功能恢復率， 給廣大患者帶來福音。

發明內容

一種快速鑒別周圍神經束性質的電化學檢測方法，它由下列步驟組成：

步驟1.將金電極在碳化硅細砂紙上打磨，再分別用加0.3μm和0.05μm氧化鋁懸濁液的 麂皮拋光成“鏡面”，最后經乙醇、二次水超聲清洗，備用，

步驟2.將金電極固定在旋轉涂布儀中，表面朝上，將0.1mL以質量比例為7∶10∶1混 合好的20％聚二甲基二烯丙基胺(重均分子量～100000-20000)水溶液，聚二甲基硅氧烷(重 均分子量～60000)和固化劑(Si-H官能交聯劑)滴涂在電極表面，啟動旋轉涂布儀，在2000～ 2500轉/分的速率下旋轉15分鐘，隨后在80℃烘箱中靜置一個小時，使電極表面聚合物薄 膜固化，

步驟3.將步驟2修飾了聚合物薄膜的金電極浸入盛有質量百分濃度為0.5％氯金酸溶液 的燒杯中，4℃下靜置8小時，通過固化劑中Si-H鍵的還原作用，使金納米粒子還原沉積 在聚合物薄膜表面，

步驟4.將步驟3修飾了聚合物-金納米粒子復合膜的金電極浸入盛有2unit/mL的標準 膽堿氧化酶溶液的eppendorf離心管中，靜置10min，通過金納米粒子良好的生物相容性，使 膽堿氧化酶富集在電極表面。

步驟5.將步驟4修飾好的金電極浸入盛有2unit/mL的標準乙酰膽堿酯酶溶液的 eppendorf離心管中，靜置10min，通過聚合物薄膜對乙酰膽堿酯酶的吸附性和金納米粒子良 好的生物相容性，使乙酰膽堿酯酶富集在電極表面。

步驟6.將步驟5修飾好的金電極(4)取出，與參比電極(5)，對電極(6)共同插入檢 測池(2)中，加入2mL?0.1M?pH?7.4的磷酸鹽緩沖液，將各電極連接在所用的電化學工作 站(7)上，電化學工作站(7)與計算機(8)相連，

步驟7.在電化學工作站的技術選項中選擇安培電流-時間曲線法，電位設置在0.7V， 運行電化學工作站進行掃描，待基線平穩后，加入2μL?0.2M/L氯化乙酰膽堿標準溶液，通 過計算機監測其電化學響應，