[發(fā)明專利]從連翹中分離抗腫瘤的三萜類化合物的提取方法及應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810019176.6
• 申請日: 2008-01-15
• 公開（公告）號: CN101230081A
• 公開（公告）日: 2008-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉寶瑞;孫婧;錢曉萍
• 申請（專利權(quán)）人: 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00;A61K31/575;A61P35/00;A61K36/634
• 代理公司: 南京中新達(dá)專利代理有限公司
• 代理人: 孫鷗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及從常用中藥連翹(Forsythia?suspensa的干燥果實(shí))中分離出三萜類化合物的提取方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

惡性腫瘤已成為常見且嚴(yán)重威脅人類生命和生活質(zhì)量的主要疾病之一。目前，化療是現(xiàn)階段治療惡性腫瘤的重要手段之一，它作為一種全身性的治療方法，有可能最大限度地殺滅患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞。但是目前已有的化療藥物在取得一定治療效果的同時也存在不容忽視的缺陷，如仍然缺乏對占惡性腫瘤90％以上的實(shí)體瘤治療有效的藥物，藥物無選擇性從而導(dǎo)致全身毒副反應(yīng)嚴(yán)重，腫瘤的耐藥性也越來越強(qiáng)。而臨床上所使用的抗腫瘤化療藥物多為國外進(jìn)口藥物，其價(jià)格昂貴，給社會和患者家庭帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

近年來，植物來源的抗腫瘤藥已逐漸引起人們重視。具有微觀蛋白抑制作用的紫杉醇、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑喜樹堿等都取得了良好的治療效果。植物來源的抗腫瘤藥物不僅在發(fā)現(xiàn)新藥方面有巨大潛力，其作用原理的深入研究可為抗腫瘤新藥的研制與開發(fā)提供新的動力。中草藥在我國的應(yīng)用歷史悠久，臨床也已積累了許多治療癌癥的寶貴經(jīng)驗(yàn)，因此從中草藥中尋找與開發(fā)自主創(chuàng)新和源頭創(chuàng)新的藥物具有重要的戰(zhàn)略意義。

連翹為木犀科植物連翹Forsythia?suspensa(Thunb.)Vahl的干燥果實(shí)，為中醫(yī)常用的清熱解毒藥，歷來被視為瘡家要藥。其味苦，無毒，性微寒，具有清熱解毒、散結(jié)消腫等功效，主治溫?zé)?、丹毒、斑疹、癰殤腫毒、瘰癘等癥。連翹的主要成分為木脂素類、黃酮類、三萜類、苯乙醇及其苷類等。

在本發(fā)明之前，對連翹生物學(xué)活性的研究主要集中在抗菌、抗病毒、抗炎、解熱、保肝等方面。常見的以連翹為原料的中成藥制劑有銀翹解毒片、雙黃連注射液、抗病毒口服液等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述缺陷，從中藥連翹中提取得到三萜類化合物，并將其作為抗腫瘤藥物應(yīng)用。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：

從連翹中分離抗腫瘤的三萜類化合物的提取方法，其主要技術(shù)步驟在于：

(1)將干燥的連翹果實(shí)粉碎；

(2)將粉碎的連翹放入95％乙醇中浸泡；

(3)待乙醇揮干后，得浸膏；

(4)將浸膏用乙酸乙酯萃取后，硅膠拌樣；

(5)將硅膠拌樣進(jìn)行硅膠柱層析；

(6)然后用石油醚、乙酸乙酯混合溶液分次洗脫；

(7)將分次洗脫的溶液點(diǎn)板合并，靜置；

(8)靜置后析出結(jié)晶；

(9)經(jīng)重結(jié)晶，得三萜類化合物，即五環(huán)三萜類化合物安博立酸和四環(huán)三萜類化合物。

本發(fā)明的另一技術(shù)方案是：

安博立酸作為抗腫瘤藥物的應(yīng)用，其主要技術(shù)特征在于將安博立酸制備成粉劑、針劑、口服膠囊。

本發(fā)明的又一技術(shù)方案是：

達(dá)瑪烷化合物作為抗腫瘤藥物的應(yīng)用，其主要技術(shù)特征在于將達(dá)瑪烷化合物制備成粉劑、針劑、口服膠囊。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和效果在于從連翹果實(shí)中利用適當(dāng)?shù)娜苊?，高效率的提取具有抗腫瘤作用而副作用較小的化合物的方法?？朔诉B翹只在抗菌、抗病毒、抗炎、解熱、保肝等方面的應(yīng)用局限。

本發(fā)明中使用的連翹為木犀科植物連翹Forsythia?suspensa(Thunb.)Vahl的干燥果實(shí)，利用乙醇等溶媒提取，減壓濃縮除去提取液的溶媒，再將浸膏用別的溶媒提取。用這樣的提取方法成功地得到了具有抗腫瘤作用的連翹中的三萜類化合物，完成了本發(fā)明。

本發(fā)明提供了一種新方法從從連翹中分離抗腫瘤的三萜類化合物，即五環(huán)三萜類化合物安博立酸和四環(huán)三萜類化合物達(dá)瑪烷化合物；四環(huán)三萜類化合物達(dá)瑪烷化合物，即達(dá)瑪-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇。本發(fā)明又將上述二種三萜類化合物作為抗腫瘤藥物予以新的應(yīng)用。

附圖說明

圖1--本發(fā)明從連翹中提取四環(huán)三萜類化合物達(dá)瑪-24-烯-3?β-乙酰氧基-20s-醇的結(jié)構(gòu)式。

圖2--連翹中提取的四環(huán)三萜類化合物達(dá)瑪-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇對人消化道腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用(IC50)。

圖3--達(dá)瑪-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇對人胃癌細(xì)胞MKN-28的形態(tài)學(xué)影響。

圖4--本發(fā)明從連翹中提取五環(huán)三萜類化合物安博立酸的結(jié)構(gòu)式。

圖5--連翹中提取的五環(huán)三萜類化合物安博立酸對人消化道腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用(IC50)。

圖6--安博立酸對人胃癌細(xì)胞MKN-28的形態(tài)學(xué)影響。

具體實(shí)施方式

下面，使用具體的實(shí)施例來說明提取方法，以及這些化合物的抗腫瘤作用。當(dāng)然這些提取方法并非只限于下列實(shí)施例。