[發明專利]芒果甙元在治療Ⅱ型糖尿病中的應用及其體外試驗模型

無效

• 申請號: 200810018769.0
• 申請日: 2008-01-23
• 公開（公告）號: CN101284001A
• 公開（公告）日: 2008-10-15
• 發明（設計）人: 孫凌冰;徐琛;南發俊;張昊;張燕;張辰宇;譚仁祥;項陽;李佳;李洪森;鄒季虹
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: A61K31/352
• 分類號: A61K31/352;A61P3/10
• 代理公司: 南京知識律師事務所
• 代理人: 胡錫瑜

一、技術領域

本發明屬于生物制藥及分子生物學技術領域，具體涉及芒果甙元在治療II型糖尿病中的應用。

二、背景技術

II型糖尿病的病因主要包括胰島細胞功能異常和胰島素抵抗。胰島細胞功能異常是一種復雜的現象，包括對葡萄糖感應的喪失，導致GSIS(glucose-stimulated?insulin?secretion)損害等。

UCP2(Uncoupling?Protein?2，解偶聯蛋白2)是解偶聯蛋白家族的成員，為一種位于線粒體內膜上的陽離子載體蛋白。它可以引起質子的滲漏，使氧化磷酸化解偶聯，ATP合成減少，能量以熱的形式散失。UCP2是胰島素分泌的負調節分子。首先，它介導了線粒體內膜的質子滲漏，這已被一系列的研究所證明，這些研究的對象涵蓋了原脂質體、線粒體以及完整細胞(Proc.Natl.Acad.Sci.，99：118-122，2002)。胰島β細胞中，如果ATP/ADP比值增高，會使ATP敏感的K⁺通道關閉，細胞膜去極化，Ca²⁺內流，從而導致胰島素分泌。UCP2介導的質子滲漏會減少ATP合成，損害胰島素分泌，從而負調節葡萄糖刺激的胰島素分泌(glucose-stimulated?insulin?secretion，GSIS)。ob/ob小鼠是肥胖導致的糖尿病動物模型，在該小鼠胰島中，UCP2表達顯著升高。另外，高血糖也能導致胰島內UCP2表達升高。更重要的是，在ob/ob小鼠中敲除UCP2，胰島素分泌的第一相能得到恢復，并且血清中胰島素含量升高，高血糖癥狀也得到改善(Cell，105：745-755，2001)。這些結果充分說明，UCP2在高血糖以及肥胖導致的胰島功能異常中發揮了重要作用。因此，有效抑制UCP2基因在胰島等組織中的表達對治療II型糖尿病有較大意義，具有該作用特點的藥物可應用于II型糖尿病的治療。

芒果甙元(norathyriol)是一種四羥基吡啶，是芒果甙的甙元。芒果甙屬雙苯吡酮類化合物，在漆樹芒果樹(Mangifera?indica)，扁桃樹(Mangifera?persiciformis)的葉、果實、樹皮，龍膽科植物東北龍膽(Gentiana?manshurica?kitag)、川西瘴芽菜(Swertia?mussotii?franch)，百合科植物知母(Anmarrhena?asphodeloides?bge.)，水龍骨科植物光石韋(Pyrrosia?calvata(Bak)china)等多種植物中存在。藥理學研究表明，芒果甙可降低糖尿病模型小鼠(KK-Ay?mice)的血糖并提高其胰島素耐量，對正常小鼠無明顯作用(1.Biol?Pharm?Bull，21(12)：1389-90，1998；2.Phytomedicine，8(2)：85-7，2001)。有報道，人腸道內的一種厭氧菌會切斷芒果甙的C-C糖甙鍵，生成芒果甙元(1.Biol?Pharm?Bull，28(9)：1672-78，2005；2.BiolPharm?Bull，28(11)：2035-39，2005)。因此，我們以芒果甙元為研究對象，運用分子生物學手段，揭示芒果甙元可下調293A細胞UCP2基因的表達，提示芒果甙的降血糖和提高胰島素耐量的作用可能是通過芒果甙元來實現的。

三、發明內容

本發明需要解決的問題是采用現代細胞生物學和分子生物學實驗方法，研究芒果甙元作為一種治療II型糖尿病的藥物的應用及其分子作用機制，提出UCP2很有可能是中醫寒熱理論的一個重要效應分子，是芒果甙元作用的靶點。同時，建立一種治療II型糖尿病的體外試驗模型。

本發明的技術方案如下：

1.本發明采用芒果甙元進行體外試驗。芒果甙元是一種四羥基吡啶，其結構式為：

(1)細胞培養、孵育方法及處理：

293A細胞用含10％胎牛血清的DMEM高糖培養液，在95％空氣+5％CO₂的環境下培養于60mm培養皿中，細胞鋪滿培養皿80％左右時，棄去上清，加入含胎牛血清低于2％的DMEM高糖培養液和終濃度分別為10、50、100μM芒果甙元(用DMSO溶解，DMSO終濃度為0.1％)，對照組細胞不加芒果甙元。孵育24小時后棄去上清，加入Trizol?1mL，充分吹打后轉入eppendoff管中，放置于-70℃冰箱中保存。

(2)細胞RNA的提取、RT-PCR和real-time?PCR：