[發明專利]一種新型非病毒陽離子型基因載體的制備方法

無效

• 申請號: 200810018650.3
• 申請日: 2008-03-07
• 公開（公告）號: CN101235384A
• 公開（公告）日: 2008-08-06
• 發明（設計）人: 顧子旭;倪沛紅;袁媛;何金林
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/64;C08F120/34;C08F220/18
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司
• 代理人: 陶海鋒

1.一種新型非病毒陽離子型基因載體的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)采用氧陰離子聚合法合成聚陽離子型電解質，即端基為生物基團的聚甲基丙烯酸-2-(烷基取代的氨基)乙酯；

(2)采用氧陰離子聚合法合成含聚陰離子型電解質的嵌段共聚物，即聚乙二醇單甲醚與聚甲基丙烯酸的嵌段共聚物MePEO-b-PMAA；

(3)將步驟(1)所得聚陽離子型電介質溶解于pH?7.4的緩沖溶液中，超聲分散，緩慢滴加DNA水溶液，攪拌2小時以上，實現聚陽離子對DNA的包裹，形成DNA/聚陽離子復合物溶液，該步驟中聚陽離子型電介質中的N原子個數與DNA中P原子個數比為4∶1～10∶1；

(4)將步驟(2)所得MePEO-b-PMAA共聚物溶解于pH?7.4的緩沖溶液中，超聲分散，緩慢滴加到步驟(3)所制得的DNA/聚陽離子復合物溶液中，攪拌2小時以上，實現聚陰離子PMAA鏈段對DNA/聚陽離子復合物的包裹，該步驟中聚陰離子PMAA鏈段中羧基的數目與聚陽離子中氮原子的數目比為1∶1～6∶1。

2.根據權利要求1所述新型非病毒陽離子型基因載體的制備方法，其特征在于所述聚陽離子型電解質的制備方法包括以下步驟：

(1)以四氫呋喃為溶劑，使氫化鉀與等物質量的含生物基團醇R_bioOH攪拌反應4～12小時，形成生物基團氧陰離子R_bioO^-K⁺，作為引發劑，所述生物基團醇R_bioOH選自維生素A₁，維生素A₂，維生素D₃，膽固醇，維生素D₂，橙花油醇，薄荷醇中的一種；

(2)將引發劑與單體甲基丙烯酸-2-(烷基取代的氨基)乙酯以摩爾比1∶10至1∶120構成聚合體系，攪拌，反應0.5～1.5小時，所述單體甲基丙烯酸-2-(烷基取代的氨基)乙酯選自甲基丙烯酸-2-(二甲氨基)乙酯、甲基丙烯酸-2-(二乙氨基)乙酯、甲基丙烯酸-2-(二異丙基氨基)乙酯中的一種；

(3)用甲醇終止反應，提純，即獲得所需的聚陽離子型電解質。

3.根據權利要求1所述新型非病毒陽離子型基因載體的制備方法，其特征在于所述嵌段共聚物MePEO-b-PMAA的制備方法包括以下步驟：

(1)以四氫呋喃為溶劑，使聚乙二醇單甲基醚MePEO與等物質量的氫化鉀攪拌反應4～6小時，形成MePEO鏈末端氧陰離子，作為引發劑；

(2)將引發劑與單體甲基丙烯酸叔丁酯(t-BMA)以摩爾比1∶10至1∶120構成聚合體系，攪拌，反應0.5～3小時；

(3)用甲醇終止反應，提純；

(4)以二氯甲烷為溶劑，在三氟乙酸存在的條件下，對共聚物MePEO-b-PtBMA水解，提純，即獲得所需的共聚物MePEO-b-PMAA。

4.根據權利要求1所述新型非病毒陽離子型基因載體的制備方法，其特征在于所述pH?7.4的溶液為鹽溶液，選自生理鹽水。

5.根據權利要求1所述新型非病毒陽離子型基因載體的制備方法，其特征在于所述pH?7.4的溶液為緩沖溶液，選自磷酸鹽溶液。

6.一種用于制備新型非病毒陽離子型基因載體的聚陽離子型電解質，其特征在于端基為生物基團，由下列通式表達：

式中，n為10～120；

R_bio-OH選自

中的一種；

R₁選自

中的一種。

7.一種用于制備非病毒陽離子型基因載體的含聚陰離子型電解質的嵌段共聚物，其特征在于聚陰離子型電解質為聚甲基丙烯酸(PMAA)鏈段，由下列通式表達：

式中，x為10～400；y為10～120。