[發(fā)明專利]一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物的質(zhì)量檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810018308.3
• 申請日: 2008-05-28
• 公開（公告）號: CN101279066A
• 公開（公告）日: 2008-10-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王延嶺
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西思壯藥業(yè)有限公司
• 主分類號: A61K36/906
• 分類號: A61K36/906;A61P15/00;G01N30/02;G01N30/36;G01N30/90;A61K33/06;A61K35/62
• 代理公司: 西安創(chuàng)知專利事務(wù)所
• 代理人: 李子安

1、一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

(1)取所述藥物組合物5g，加甲醇10～30mL，浸漬50～80分鐘，濾過，取濾液5～25mL，蒸干，殘渣加水5～25mL使溶解，再加鹽酸0.5～1.5mL，置水浴中加熱20～40分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2～3次，每次10～30mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇0.5～1.5mL使溶解，作為供試品溶液；另取水蛭對照藥材0.5g，加60％～80％乙醇10mL，冷浸12小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯∶乙酸乙酯的體積比為30∶1，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的熒光斑點；

(2)取所述藥物組合物5g，加乙醚10～30mL，冷浸3～5小時，過濾，用乙醚洗滌殘渣，合并，濾液蒸干，加三氯甲烷1～3mL充分溶解，作為供試品溶液；另取莪術(shù)對照藥材2g，同供試品制備方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各4μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，石油醚和乙酸乙酯的體積比為18∶2，展開，取出，晾干，噴以香草醛硫酸溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；

(3)取所述藥物組合物5g，加甲醇10～30mL浸漬50～80分鐘，濾過，取濾液5～25mL，蒸干，殘渣加水5～25mL使溶解，再加鹽酸0.5～1.5mL，置水浴中加熱20～40分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2～3次，每次10～30mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇0.5～1.5mL使溶解，作為供試品溶液；另取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1mL含1mg大黃素或1mg大黃素甲醚的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15μL，大黃素對照品和大黃素甲醚對照品各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸為展開劑，石油醚、甲酸乙酯和甲酸的體積比為15∶5∶1，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點；

(4)取所述藥物組合物5g，加乙醚8～20mL，冷浸3～5小時，濾過，將濾液濃縮至干，殘渣加甲醇溶解至3～6mL，作為供試品溶液；另取蛇床子素對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg蛇床子素的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15μL，對照品溶液6μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯和乙酸乙酯的體積比為30∶1，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

(5)取所述藥物組合物5g，加甲醇10～30mL，浸漬40～80分鐘，濾過，濾液蒸干，加水10～20mL使溶解，再加鹽酸0.5～1.5mL，置水浴中加熱20～40分鐘，立即冷卻，用乙醚分1～3次提取，每次10～30mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇0.5～2mL使溶解，作為供試品溶液；另取桃仁對照藥材1g，加乙醚5～15mL，超聲處理3～10分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，石油醚和乙酸乙酯的體積比為18∶2，展開，取出，晾干，噴以香草醛硫酸溶液，烘約2～8分鐘，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色的斑點；

(6)取所述藥物組合物5g，加水10～20mL，攪拌使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加以水飽和的正丁醇提取1～3次，每次10～20mL，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌1～3次，每次5～15mL，棄去水液，正丁醇液置水浴上濃縮至約0.5～2mL，加適量的中性氧化鋁在水浴上拌勻干燥，裝入預(yù)先裝填好的中性氧化鋁小柱，以50～80mL乙酸乙酯-甲醇洗脫，乙酸乙酯和甲醇的體積比為1∶1，收集洗脫液，蒸干，殘渣加乙醇0.5～2mL使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1mL含2mg芍藥苷的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和甲酸的體積比為40∶5∶10∶0.2，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液，烘2～8分鐘，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；

(7)取所述藥物組合物5g，加乙醚30～50mL，加熱回流40～80分鐘，濾過，藥渣揮干乙醚，加甲醇20～40mL，加熱回流50～80分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加水30～60mL使溶解，用正丁醇提取2～4次，每次15～30mL，合并正丁醇溶液，用水洗滌2～4次，蒸干，殘渣加甲醇3～8mL使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含1.5mg黃芩苷的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水的體積比為5∶3∶1∶1，預(yù)平衡10～50分鐘，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；

(8)血竭素的含量測定：分別制備供試品溶液和對照品溶液，用高效液相色譜法測定；對照品為：血竭素高氯酸鹽；色譜條件與系統(tǒng)適用性為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液為流動相，乙腈和0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液的體積百分比為30～70∶30～70，A為乙睛，B為0.05mol/L磷酸二氫鉀，A+B＝100％；UVD檢測器，檢測波長為440nm；柱溫30～40℃，理論塔板數(shù)按血竭素高氯酸鹽峰計算應(yīng)不低于4000；

其中對照品溶液的制備：精密稱取血竭素高氯酸鹽對照品5mg，置10mL棕色量瓶中，加3％磷酸甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL，置5mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每1mL含血竭素高氯酸鹽0.1mg，血竭素的重量＝血竭素高氯酸鹽的重量/1.377；

其中供試品溶液的制備：精密稱取治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物2.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入3％磷酸甲醇溶液10～50mL，塞緊，搖勻，超聲處理3～30分鐘，功率300W，超聲頻率50KHz，濾過，精密量取續(xù)濾液1～5mL，置5～25mL棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得；

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定即得；藥物組合物每粒含血竭以血竭素計，不得少于0.50mg，血竭素的分子式C₁₇H₁₄O₃。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于：

(1)取所述藥物組合物5g，加甲醇20mL浸漬1小時，濾過，取濾液15mL，蒸干，殘渣加水15mL使溶解，再加鹽酸1mL，置水浴中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液；另取水蛭對照藥材0.5g，加70％乙醇10mL冷浸12小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μL，分別點于同一含0.3％羧甲基纖維素鈉的硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯和乙酸乙酯的體積比為30∶1，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的熒光斑點；

(2)取所述藥物組合物5g，加乙醚20mL，冷浸4小時，過濾，用乙醚洗殘渣，合并，濾液蒸干，30℃以下蒸干，加三氯甲烷2mL充分溶解，作為供試品溶液；另取莪術(shù)對照藥材2g，同供試品制備方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各4μL，分別點于同一以0.3％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，石油醚和乙酸乙酯的體積比為18∶2，展開，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；所述石油醚為沸點60～90℃的石油醚；

(3)取藥物組合物5g，加甲醇20mL浸漬1小時，濾過，取濾液15mL，蒸干，殘渣加水15mL使溶解，再加鹽酸1mL，置水浴中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液；另取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇的制成每1mL含1mg大黃素或1mg大黃素甲醚的溶液的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15μL，大黃素對照品和大黃素甲醚對照品各10μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸為展開劑，石油醚、甲酸乙酯和甲酸的體積比為15∶5∶1，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點；所述石油醚為沸點30～60℃的石油醚；

(4)取所述藥物組合物5g，加乙醚12mL，冷浸4小時，濾過，將濾液濃縮至干，殘渣加甲醇溶解至5mL，作為供試品溶液；另取蛇床子素對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15μL，對照品溶液6μL，分別點于同一以0.3％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯和乙酸乙酯的體積比為30∶1，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

(5)取所述藥物組合物5g，加甲醇20mL浸漬1小時，濾過，濾液蒸干，加水15mL使溶解，再加鹽酸1mL，置水浴中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚分二次提取，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加1mL使溶解，作為供試品溶液；另取桃仁對照藥材1g，加乙醚10mL，超聲處理5分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一以0.3％的羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，石油醚和乙酸乙酯的體積比為18∶2，展開，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，在105℃烘5分鐘，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色的斑點；所述石油醚為沸點60～90℃的石油醚；

(6)取所述藥物組合物5g，加水15mL，攪拌使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加以水飽和的正丁醇提取2次，每次15mL，合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次10mL，棄去水液，正丁醇液置水浴上濃縮至約1mL，加適量的中性氧化鋁在水浴上拌勻干燥，裝入預(yù)先裝填好的內(nèi)徑1.5cm的中性氧化鋁小柱，小柱容量5g，以60mL的乙酸乙酯-甲醇洗脫，乙酸乙酯和甲醇的體積比為1∶1，收集洗脫液，蒸干，殘渣加乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和甲酸的體積比為40∶5∶10∶0.2，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘5分鐘，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；

(7)取所述藥物組合物5g，加乙醚40mL，加熱回流1小時，濾過，藥渣揮干乙醚，加甲醇30mL，加熱回流1小時，濾過，濾液揮干，殘渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇溶液，用水洗滌3次，蒸干，殘渣加甲醇5mL使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含1.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μL，分別點于同一以含4％乙酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水的體積比為5∶3∶1∶1，預(yù)平衡30分鐘，展開，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；

(8)血竭素的含量測定：分別制備供試品溶液和對照品溶液，用高效液相色譜法測定；對照品為：血竭素高氯酸鹽；色譜條件與系統(tǒng)適用性為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液為流動相，乙腈和0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液的體積百分比為50∶50，A為乙睛，B為0.05mol/L磷酸二氫鉀，A+B＝100％；UVD檢測器，檢測波長為440nm；柱溫40℃，理論塔板數(shù)按血竭素高氯酸鹽峰計算應(yīng)不低于4000；

其中對照品溶液的制備：精密稱取血竭素高氯酸鹽對照品5mg，置10mL棕色量瓶中，加3％磷酸甲醇溶液使溶解并稀釋至，搖勻，精密量取1mL，置5mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每1mL含血竭素高氯酸鹽0.1mg，血竭素的重量＝血竭素高氯酸鹽的重量/1.377；

其中供試品溶液的制備：精密稱取治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物2.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入3％磷酸甲醇溶液30mL，塞緊，搖勻，超聲處理20分鐘，功率300W，超聲頻率50kHz，濾過，精密量取續(xù)濾液3mL，置15mL棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得；

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定即得；藥物組合物每粒含血竭以血竭素計，不得少于0.50mg，血竭素的分子式C₁₇H₁₄O₃。