[發(fā)明專利]一種治療白發(fā)藥物的制備方法及其在臨床中的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810017817.4
• 申請日: 2008-03-21
• 公開（公告）號: CN101537171A
• 公開（公告）日: 2009-09-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 羅洋;郝飛;葉慶佾
• 申請（專利權(quán)）人: 羅洋
• 主分類號: A61K38/17
• 分類號: A61K38/17;A61K9/19;A61P17/00
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司
• 代理人: 馬正良

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種藥物的制備方法，特別是涉及一種治療白發(fā)藥物的制備方法及其在臨床中的應(yīng)用。

技術(shù)背景

白發(fā)是臨床常見的一種疾病，目前還沒有一種有效治療方法。由于生活節(jié)奏的加快，白發(fā)還有進(jìn)一步升高的趨勢。

在毛乳頭與毛根的毛球之間，分布著許多大細(xì)胞，是樹枝狀色素細(xì)胞，又名黑素細(xì)胞，其樹狀突起分散伸出到毛皮質(zhì)，髓質(zhì)的末分化細(xì)胞之間，產(chǎn)生的黑素順著突起移交給所到達(dá)的細(xì)胞，使毛皮質(zhì)、髓質(zhì)都有了色素而帶顏色。人的毛發(fā)以皮質(zhì)為主，內(nèi)貫少許髓質(zhì)，故毛發(fā)黑色的深淺主要決定于皮質(zhì)中黑素的量以及其細(xì)胞內(nèi)外存在的氣泡。皮質(zhì)中黑素越多，細(xì)胞之間氣泡越少，頭發(fā)顏色就越黑；反之，黑素量少，氣泡多，由于空氣泡產(chǎn)生光的反射，使毛發(fā)的顏色變淡以至成白發(fā)。黑素的生物合成過程一般認(rèn)為是先由酪氨酸在酪氨酸梅催化下氧化成多巴，多巴在酪氨酸酶作用下氧化成多巴醌，多巴醌經(jīng)過合成環(huán)化進(jìn)一步氧化成某些中間產(chǎn)物如紅痣素，紅痣素經(jīng)過重排和脫羧基生成5-6二羥基吲哚，后者再經(jīng)過氧化生成相應(yīng)的醌，吲哚5-6醌相互聚合最后生成黑素。頭發(fā)的皮質(zhì)中黑素的數(shù)量變少，酪氨酸含量減少和酪氨酸酶活性降低，細(xì)胞之間的氣泡增多，是形成白發(fā)的重要因素。

一般認(rèn)為，人毛乳頭細(xì)胞(dermal?papilla?cells，DPC)在毛囊的發(fā)育及周期性生長調(diào)控中起重要作用。要闡明人毛乳頭細(xì)胞對調(diào)節(jié)毛囊生長和發(fā)育的機(jī)制，必須從人毛乳頭細(xì)胞自身分泌的生物活性成份著手，這也是今后毛囊研究的重要內(nèi)容之一。本發(fā)明在建立人毛乳頭細(xì)胞體外培養(yǎng)模型基礎(chǔ)上，應(yīng)用1、2代人毛乳頭細(xì)胞的培養(yǎng)上清制成條件培養(yǎng)基，觀察其對不同傳代的人毛乳頭細(xì)胞生長狀態(tài)的影響，發(fā)現(xiàn)人毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液(dermal?papilla?cellconditional?medium?DPCCM)能將非凝集生長的人毛乳頭細(xì)胞有效誘導(dǎo)為凝集性生長狀態(tài)，并促進(jìn)細(xì)胞增殖。為進(jìn)一步分析人毛乳頭細(xì)胞生長活性蛋白的體內(nèi)生物學(xué)活性，我們將人毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液制成凍干粉，初步應(yīng)用于白發(fā)患者，發(fā)現(xiàn)其有明顯改善白發(fā)的治療效果。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于上述，本發(fā)明的目的在于提供一種治療白發(fā)的藥物。

本發(fā)明的另一目的在于制備治療白發(fā)藥物中的用途。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

一種用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)的1、2代人毛乳頭細(xì)胞的培養(yǎng)上清液在制備治療白發(fā)藥物，其特征在于所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基按15ml人AB型血清與85ml低糖DMEM培養(yǎng)基，0.24gHepes，0.2g碳酸氫鈉，0.03g?L-谷氨酰胺的配比構(gòu)成。

本發(fā)明的優(yōu)點和產(chǎn)生的有益效果是：

人毛乳頭細(xì)胞為分泌性細(xì)胞，在體外培養(yǎng)時可分泌許多蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)可促進(jìn)毛囊的生長和發(fā)育，在體外實驗已證明其有確切的生物學(xué)活性，但其應(yīng)用于臨床治療白發(fā)還未見報道，本發(fā)明在原有的培養(yǎng)人毛乳頭細(xì)胞的基礎(chǔ)上，改進(jìn)其培養(yǎng)基，用人AB型血清替代小牛血清，成功地培養(yǎng)出人毛乳頭細(xì)胞，收集培養(yǎng)過1、2代人毛乳頭細(xì)胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，用于臨床治療白發(fā)，觀察其治療效果，發(fā)現(xiàn)有確切的治療作用，取得了良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。

應(yīng)用本發(fā)明制備的藥物在治療白發(fā)中有明顯的療效，本藥物所用細(xì)胞和培養(yǎng)血清均對人體均無抗原性，用于人體無任何過敏反應(yīng)，本發(fā)明用含人AB型血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)人毛乳頭細(xì)胞，較以前用小牛血清培養(yǎng)人毛乳頭細(xì)胞在技術(shù)上取得了突破，為本藥物應(yīng)用于臨床奠定了基礎(chǔ)，這也是本發(fā)明關(guān)鍵技術(shù)的核心所在。此外，本發(fā)明所用藥物為皮下注射，其有效藥物利用度大大提高，其制備工藝十分考究，實用性強(qiáng)，能為廣大患者服務(wù)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明治療白發(fā)前示意圖

圖2為本發(fā)明治療白發(fā)1月后示意圖

圖3為本發(fā)明治療白發(fā)2月后示意圖

圖4為本發(fā)明治療白發(fā)3月后示意圖

具體實施方式

下面通過實施例對本發(fā)明再作進(jìn)一步的說明：

藥物的制備方法及其臨床應(yīng)用是通過以下步驟來實現(xiàn)：

(1).試劑和材料

低糖DMEM培養(yǎng)基：購自Sigma公司。Hepes：購自Boehringer?Mannheim公司。健康人AB型血清：第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院輸血科提供。

(2).藥物制備的方法

2.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備：

2.1.1人AB型血清的制備

a)采集健康獻(xiàn)血員(經(jīng)查排除HIV、HBV、HCV、梅毒螺旋體感染)全血200ml入無抗凝劑的血袋；

b)將全血血袋37℃水箱中放置1小時；

c)2000rpm離心30分鐘；