[發明專利]一種遺骸核DNA個體識別的新方法

無效

• 申請號: 200810017405.0
• 申請日: 2008-01-25
• 公開（公告）號: CN101225444A
• 公開（公告）日: 2008-07-23
• 發明（設計）人: 李生斌;托婭;鄭海波;李雙頂;鞏五虎
• 申請（專利權）人: 西安交通大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司
• 代理人: 李鄭建

1.一種遺骸核DNA個體識別方法，其特征在于，按以下步驟進行：

步驟一，樣本制備：

1)骨：用高壓滅菌砂紙抹去骨骼表面0.5mm厚層，254nm紫外線照射1小時防止外源性DNA污染；然后用冷的去離子水、乙醇、乙醚各振搖15分鐘，取出干燥，將骨片放入盛有液氮的研缽中，用電鉆鉆取骨粉備用；

2)牙：254nm紫外線照射1小時，然后用冷的去離子水、乙醇、乙醚各振搖15分鐘，取出干燥；取牙根牙骨質及牙髓腔內壁的骨粉備用；

步驟二，骨、牙齒組織DNA分離和純化：

1)取骨粉或牙粉置于1.5ml的Eppendorf可調液移管中，加1.0ml?0.5M?Na2EDTA?PH8.0，25ul蛋白酶K，將Eppendorf可調液移管置于旋轉混搖器上，室溫混搖24小時；

2)將樣品置于56℃干熱器上，室溫繼續消化2小時；

3)離心13000rpm，5分鐘；

4)取上清液700ul移至另一潔凈的試管中，加等體積的6M?GuSCN，20ul二氧化硅懸浮液，室溫搖勻2小時；

5)離心13000rpm，20秒，棄上清液保留硅珠；

6)用70％乙醇在-20℃條件下，洗滌硅珠兩次，每次離心13000rpm，時間20秒，棄上清液保留硅珠；

7)用丙酮在-20℃條件下，洗滌硅珠一次。每次離心13000rpm，時間20秒，棄上清液保留硅珠；

8)將樣品置于56℃干熱器上，10分鐘烘干硅珠；

9)用65ul滅菌去離子水懸浮硅珠，56℃15分鐘洗脫DNA，每5分鐘振搖一次；

10)離心13000rpm，2分鐘，將60ul?DNA溶液轉移至新管中，-20℃保存備用；

步驟三，采用Bio-RAD凝膠成像分析系統對所得的DNA進行定量分析。

2.如權利要求1所述的遺骸核DNA個體識別方法，其特征在于，所述的二氧化硅懸浮液按照以下方法制備：

將二氧化硅12g置于100ml去離子水中，充分混勻置于100ml量筒內室溫沉降24小時；取上層溶液85ml加去離子水100ml，充分混勻置于100ml量筒內室溫沉降5小時；取上層溶液85ml加120ul?10M?HCL，充分混勻；分裝、高壓滅菌即得到二氧化硅懸浮液。