[發明專利]一種檢測纖溶酶類物質纖溶活性的試劑盒

無效

• 申請號: 200810017283.5
• 申請日: 2008-01-11
• 公開（公告）號: CN101216432A
• 公開（公告）日: 2008-07-09
• 發明（設計）人: 齊香君;史卓強;桂麗
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;C12Q1/37
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司
• 代理人: 張震國

技術領域

本發明涉及一種檢測試劑盒，具體涉及一種檢測纖溶酶類物質纖溶活性的試劑盒。

背景技術

目前，相關纖溶酶類物質的體外檢測方法常用纖維蛋白平板法和瓊脂糖-纖維蛋白平板法。但上述方法，存在著制板操作繁雜，試劑成本高，測定結果受操作技術影響較大等缺點。

發明內容

本發明的目的在于提供一種操作簡單、成本低，能夠實現體外定性、定量檢測纖溶酶類物質纖溶活性的試劑盒及檢測方法。

為達到上述目的，本發明采用的技術方案是：首先取300ml新鮮牛血液，在3500-3800r/min離心20分鐘，收集血漿，并在血漿中加入500ml蒸餾水稀釋；然后在稀釋后的血漿中滴加300ml飽和度為80％的冷硫酸銨，滴加速度為2-3滴/秒，在4℃靜置6-8小時后在3500-3800r/min離心15分鐘，收集沉淀物；將沉淀物溶于150ml，0.1mol/L的NaCl溶液中，再加入300ml的蒸餾水稀釋；然后再在稀釋液中滴加200ml飽和度為80％的冷硫酸銨，滴加速度為2-3滴/秒，在4℃靜置6-8小時后以3500-3800r/min離心15分鐘，收集沉淀物；將沉淀物溶于150ml，0.2mol/L，pH值為7.4的PBS緩沖液中；在溫度-50℃至-60℃，真空度0.08Mbar下真空冷凍干燥20-22小時得到牛血提取物；取0.5625-0.6875g的牛血提取物溶于37.5ml的pH值為7.4的PBS緩沖液中，取1.000-1.125g的瓊脂粉溶于62.5ml水中加熱至完全溶解，然后將兩種溶液混合并在55℃保溫5min，趁熱倒平板并搖勻，得到檢測試劑盒。

按照本發明的方法制備的試劑盒，不僅可以快速、靈敏、準確地檢測纖溶酶類物質是否具備溶栓活性，而且可以與標準品對比，計算相對溶栓活性，具有操作簡單，檢測成本低廉的優點。

附圖說明

圖1是采用本發明的試劑對纖溶酶類物質纖溶活性測定效果示意圖；

圖2尿激酶濃度與纖溶面積關系曲線。

具體實施方式

具體實施方式

實施例1：尿激酶注射粉針纖溶活性測定

將醫用尿激酶粉針劑配制成200IU/ml的溶液。

首先取300ml新鮮牛血液，在3500r/min離心20分鐘，收集血漿，并在血漿中加入500ml蒸餾水稀釋；然后在稀釋后的血漿中滴加300ml飽和度為80％的冷硫酸銨，滴加速度為2-3滴/秒，在4℃靜置6小時后在3500r/min離心15分鐘，收集沉淀物；將沉淀物溶于150ml，0.1mol/L的NaCl溶液中，再加入300ml的蒸餾水稀釋；然后再在稀釋液中滴加200ml飽和度為80％的冷硫酸銨，滴加速度為2-3滴/秒，在4℃靜置8小時后以3500r/min離心15分鐘，收集沉淀物；將沉淀物溶于150ml，0.2mol/L，pH值為7.4的PBS(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液)緩沖液中；在溫度-60℃，真空度0.08Mbar下真空冷凍干燥20小時得到牛血提取物；取0.5625g的牛血提取物溶于37.5ml的pH值為7.4的PBS緩沖液中，取1.000g的瓊脂粉溶于62.5ml水中，然后將兩種溶液混合并在55℃保溫5min得到檢測試劑(該劑量的檢測試劑可以一次制作7個直徑為9cm平板)。將檢測試劑趁熱倒入平板中，并晃動使其均勻。待平板完全冷卻后，打孔，定量吸取5ul樣品，加入孔內。將平板加蓋，31℃恒溫孵育8-10小時，即可觀察到在平板上有明顯的纖溶圈出現。進行定量分析時，通過與標準品溶液對比纖溶圈面積大小，可以計算出相對活性。

實施例2：納豆激酶的纖溶活性測定

將納豆激酶發酵液抽濾，濾液用蒸餾水適當稀釋，備用。