[發明專利]萃取法分離肝素鈉中的多硫酸軟骨素的方法

有效

• 申請號: 200810015869.8
• 申請日: 2008-05-09
• 公開（公告）號: CN101575385A
• 公開（公告）日: 2009-11-11
• 發明（設計）人: 曲士業;劉乃山;遲培升
• 申請（專利權）人: 青島九龍生物醫藥有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10;C08B37/08;B01D11/04;C12P19/04
• 代理公司: 青島聯智專利商標事務所有限公司
• 代理人: 崔濱生

1.一種萃取法分離肝素鈉中的多硫酸軟骨素的方法，其特征在于：采用丙酮萃取法將肝素鈉中的多硫酸軟骨素去除。?

2.根據權利要求1所述的萃取法分離肝素鈉中的多硫酸軟骨素的方法，其特征在于所述丙酮萃取法包括如下步驟：?

一、提取?

1、粗品溶解：?

開啟水閥，加入一定量飲用水，再將肝素鈉粗品加入到反應罐中，邊攪邊加，按原料與飲用水1∶(6-7)比例溶解，攪拌5-10小時后，用攪拌棒試底部是否全部溶解；?

2、酶解：?

將上一步溶解液，先用鹽酸溶液調PH7.0-8.0，升溫至50-55℃之間時加入胃蛋白酶5-10g/億單位，再加入10-20g/億單位胰酶，50-55℃保溫2-4小時；?

3、急升溫：?

將上一步酶解液在30～40分鐘內升溫至85-90℃，靜止10-30分鐘，開攪拌，通入循環水降溫，待溫度降至50-55℃時，用2-6mol/L氫氧化鈉溶液調PH10.0-12.0，靜止分層20-30小時；?

4、底部沉淀的雜質離心：?

虹吸上清，用40-100目濾袋過濾，過濾后的溶液分為上清液和下層沉淀，留上清液待沉淀，下層沉淀放離心機離心，離心后留上層離心液；?

二、精制?

1、第一次沉淀：?

待上述上清液和離心液溫度降至20-30℃，加入20-30g/L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸將濾液調PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20℃時達到45～50％，沉淀10-12小時；?

2、第一次氧化：棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉?溶液將溶液調PH10.0-12.0，然后加入體積3-5％雙氧水，氧化10-12小時；?

3.?第二次沉淀：溶液加入20-30g/L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調將溶液PH6.0-7.0，邊攪邊加濃度為95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20℃時達到45～50％，沉淀10-12小時；?

4.?第二次氧化：棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調PH10.0-12.0，然后加入體積3-5％雙氧水，氧化10-12小時；?

5.?第三次沉淀：溶液加入20-30g/L氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調PH6.0，邊攪邊加濃度為95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20℃時達到45～50％，沉淀10-12小時；?

6.?第三次氧化：棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調PH10.0-12.0，然后加入體積3-5％雙氧水，氧化10-12小時；?

7.?第四次沉淀：上一步溶液若有沉淀物析出，則用離心機離心，沒有析出則直接加入20-30g/L氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調PH6.0-7.0，將溶液放冷庫中冷凍至-10℃--5℃，邊攪邊加-10℃--5℃的丙酮，使得丙酮占溶液的質量百分含量為40-45％，-5℃-0℃保溫24-30小時，然后將廢丙酮棄去，多硫酸軟骨素被丙酮帶走，留底部沉淀物用純化水溶解，溶液再加入20-30g/L氯化鈉，用鹽酸溶液調將溶液PH6.0-7.0，邊攪邊加乙醇，使乙醇濃度在20℃時為45-50％，沉淀10-12小時；?

8.?將沉淀物用純化水按2-5L/億單位溶解后，用孔徑0.22-0.3微米濾膜板框機微濾，用乙醇沉淀，使乙醇濃度達75-80％，再加入23-26％的氯化鈉溶液，每1升溶液加6-10ml氯化鈉溶液，靜止沉淀10-12小時；?

9.?將上層乙醇棄去，加入無水乙醇脫水，邊攪邊加，使乙醇濃度為97-99％，靜止24-30小時，棄去上層乙醇，將不銹鋼砂芯棒放在產品中，用真空泵通過管道和過濾瓶把剩余乙醇抽干，待干燥；?

10.?將抽干的產品均勻放置在不銹鋼盤中，放在真空干燥箱中抽真空，用循環水加溫，溫度35-60℃，烘干70-80小時；?

11.?包裝：將產品取出，稱重，使每包裝袋5kg，用封口機封口，放在鋁桶中待驗。?

3.根據權利要求2所述的萃取法分離肝素鈉中的多硫酸軟骨素的方法，其特征在于：第四次沉淀后的溶液進行QA取樣化驗，測吸光度：260nm＜0.1；400nm＜0.02；若不合格，繼續重復上面過程，若合格移交下一工序。?