[發明專利]外源內共生菌向煙粉虱水平轉染的方法

無效

• 申請號: 200810014040.6
• 申請日: 2008-01-23
• 公開（公告）號: CN101220377A
• 公開（公告）日: 2008-07-16
• 發明（設計）人: 褚棟;陶云荔;劉國霞;方華;叢斌
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院高新技術研究中心
• 主分類號: C12N15/89
• 分類號: C12N15/89
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司
• 代理人: 許德山

1.一種外源內共生菌向煙粉虱水平轉染的方法，包括外源內共生菌沃爾巴氏體的制備、煙粉虱偽蛹受體的制備、注射、注射后煙粉虱偽蛹受體的培養，其特征在于，煙粉虱偽蛹受體的制備具體步驟如下：

將雙面膠一面貼在潔凈的載玻片上，在雙面膠的邊緣切除1mm的膠紙，露出1mm的膠面；采集煙粉虱偽蛹并背部向上固定在該膠面上，即得煙粉虱偽蛹受體。

2.如權利要求1所述的外源內共生菌向煙粉虱水平轉染的方法，其特征在于，所述外源內共生菌沃爾巴氏體的制備具體步驟如下：

將米蛾的卵利用SPG緩沖液漂洗4-8次；在滅菌管中，使用SPG緩沖液將米蛾的卵進行勻漿，300g離心5-10min，將上清液轉移到干凈的0.2mL滅菌管中，12000g離心10-20min，除去上清液，用SPG緩沖液將沉淀懸浮并在300g離心5min，取上清夜，即為純化的內共生菌，將純化的內共生菌在室溫下保存備用。

3.如權利要求1所述的外源內共生菌向煙粉虱水平轉染的方法，其特征在于，所述的注射步驟具體如下：

取直徑小于20μm的針頭；在IM?300注射儀上將制得的外源內共生菌沃爾巴氏體分別注射入制得的煙粉虱偽蛹受體內，得水平轉染后的煙粉虱偽蛹。

4.如權利要求1所述的外源內共生菌向煙粉虱水平轉染的方法，其特征在于，所述注射后煙粉虱偽蛹受體的培養的具體步驟如下：

將水平轉染后的煙粉虱偽蛹放于恒溫27℃、濕度(RH)60％-80％的氣候培養箱中；培養24小時，然后采集羽化成蟲。

5.如權利要求2所述的外源內共生菌向煙粉虱水平轉染的方法，其特征在于，外源內共生菌沃爾巴氏體的制備步驟中，所述的室溫保存時間為0-5小時。