[發(fā)明專(zhuān)利]貝類(lèi)親本性別鑒定的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810013314.X
• 申請(qǐng)日: 2008-09-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101377485A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 閆喜武;楊鳳;張國(guó)范;張躍環(huán);霍忠明;趙越
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 大連水產(chǎn)學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/48
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/48;A61B10/02
• 代理公司: 大連東方專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 趙淑梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及貝類(lèi)親本性別鑒定的方法，具體為一種無(wú)繁殖損傷的貝類(lèi)親本性別鑒定的方法。

背景技術(shù)

貝類(lèi)多為雌雄異體，雌雄同體種類(lèi)也相當(dāng)普遍。貝類(lèi)雖分為雌雄異體和雌雄同體，但這種區(qū)分并不是恒定不變的，雌雄異體的種類(lèi)可以發(fā)生性逆轉(zhuǎn)而互換性別，雌雄同體種類(lèi)也能因性變而成為雌雄異體。在雌雄異體的種類(lèi)中，除少數(shù)種類(lèi)為雌雄異形即兩性第二性征比較鮮明，可根據(jù)外部性征鑒別雌雄外，絕大多數(shù)的雌雄異體的貝類(lèi)為雌雄同形即兩性第二性征不明顯，故很難根據(jù)外部性征識(shí)別雌雄。由于對(duì)雌雄異體型貝類(lèi)親本的性別鑒定困難，使得海產(chǎn)工作者在開(kāi)展貝類(lèi)的近緣、遠(yuǎn)緣雜交，家系建立，尤其是群體雜交、大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)遇到了很大的困難。

目前，對(duì)貝類(lèi)的性別方面的研究中，張國(guó)范等(2003)采用雌雄同體的海灣扇貝建立了自交系；在雌雄異體型貝類(lèi)方面，授權(quán)公告號(hào)為CN1263374C的中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利公開(kāi)了一種雌雄異體型貝類(lèi)自交系的建立方法，該發(fā)明專(zhuān)利的目的在于在雌雄異體的貝類(lèi)中尋找雌雄同體的貝類(lèi)，建立子代純系，可以加快基因純化速度，淘汰致死基因，大大加快雌雄異體型貝類(lèi)的品種選育速度；而如何辨別雌雄異體的貝類(lèi)，也是一個(gè)亟待解決的難題。

授權(quán)公告號(hào)為CN100382683C的中國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)了一種櫛孔扇貝的判性系及制備方法和應(yīng)用。根據(jù)貝殼顏色來(lái)判斷性別，建立判性系，該發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單、易行，不需要專(zhuān)用的設(shè)備，容易在生產(chǎn)中推廣。然而，該發(fā)明的判性系具有品種單一，識(shí)別率低的缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在解決以往對(duì)雌雄異體型貝類(lèi)親本性別鑒定困難的問(wèn)題，提供一種貝類(lèi)親本性別鑒定的方法，經(jīng)該方法鑒定好的親貝，可以正常產(chǎn)卵排精，針對(duì)外觀上無(wú)法識(shí)別的雌雄異體型貝類(lèi)親本具有普遍的通用性。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：采用直徑為0.6mm的電鉆，根據(jù)要鑒定貝的種類(lèi)，確定貝類(lèi)親本的性腺位置，在貝類(lèi)親本的殼上鉆孔直至深入至性腺部位，用消毒過(guò)的微型注射器取出精或卵，在顯微鏡下采用水滴法，加入少許海水，進(jìn)行性別鑒定，卵在海水中發(fā)散，在顯微鏡下為圓形或梨形；精子在海水中為煙霧狀，顯微鏡下為蝌蚪狀。

本發(fā)明的工藝過(guò)程包括以下步驟：

第一步、電鉆鉆頭直徑的選擇：電鉆鉆頭直徑的大小，直接決定了貝類(lèi)的受損傷程度。鉆頭直徑越小，貝類(lèi)的受損程度越小。但是由于鉆頭的堅(jiān)硬程度的限制，直徑過(guò)小的鉆頭在對(duì)貝殼鉆孔時(shí)，會(huì)發(fā)生折斷、碎裂等現(xiàn)象，故一般選用鉆頭的最小直徑規(guī)格為0.6mm。貝類(lèi)的精子很小，卵徑大多集中40-90μm，這樣可以取出成熟的精或卵。

第二步、貝類(lèi)性腺部位的確定：大多數(shù)的雙殼貝類(lèi)，其性腺在內(nèi)臟團(tuán)中，而每種貝類(lèi)的性腺所在部位不同，需先確定好性腺的位置，然后采用電鉆小心謹(jǐn)慎進(jìn)行鉆孔。

第三步、微型注射器的處理：對(duì)微型注射器的要采取嚴(yán)格的消毒，尤其是針頭部位，切忌給貝類(lèi)帶來(lái)外來(lái)的病原菌，使貝類(lèi)不能夠正常產(chǎn)卵排精。在所述消毒過(guò)程中采用青霉素來(lái)消毒效果最佳。

第四步、顯微鏡下性別鑒定：將取好的樣品放置在昆蟲(chóng)培養(yǎng)皿中，采用水滴法，加入少許海水，進(jìn)行性別區(qū)分。若果是卵，在海水中發(fā)散，在顯微鏡下為圓形或梨形；若果是精子，在海水中為煙霧狀觀察，顯微鏡下為蝌蚪狀；如果是精卵同時(shí)存在，顯微鏡下為雌雄同體型；若果是存在寄生蟲(chóng)的親本，顯微鏡下可以看見(jiàn)多種寄生蟲(chóng)。

本發(fā)明的有益效果是：針對(duì)外觀上無(wú)法識(shí)別的雌雄異體型貝類(lèi)親本具有普遍的通用性，識(shí)別率在98％以上，且經(jīng)該方法鑒定好的親貝可以正常繁殖，產(chǎn)卵排精率在95％以上，這為開(kāi)展貝類(lèi)的近緣、遠(yuǎn)緣雜交，家系建立，尤其是群體雜交，大規(guī)模生產(chǎn)奠定了良好的基礎(chǔ)。這對(duì)貝類(lèi)的遺傳育種具有重要的指導(dǎo)意義。

具體實(shí)施方式

下面以菲律賓蛤仔、寬殼全海筍、青蛤、四角蛤蜊、中國(guó)蛤蜊、薄片鏡蛤的親本性別鑒定作為實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制：

實(shí)施例1

第一步、電鉆鉆頭直徑的選擇：于2001-2003年，開(kāi)始選用電鉆對(duì)菲律賓蛤仔莆田群體和大連群體親本進(jìn)行性別鑒定。選用的直徑為0.6mm的鉆頭，菲律賓蛤仔的卵徑為64-72μm，這樣可以取出成熟精或卵。

第二步、貝類(lèi)性腺部位的確定：菲律賓蛤仔的性腺在內(nèi)臟團(tuán)中，先解剖若干個(gè)成熟的親貝確定性腺部位，然后采用電鉆小心謹(jǐn)慎進(jìn)行鉆孔。

第三步、微型注射器的處理：采用青霉素對(duì)微型注射器的進(jìn)行嚴(yán)格的消毒，尤其是針頭部位，切忌給貝類(lèi)帶來(lái)外來(lái)的病原菌，使貝類(lèi)不能夠正常產(chǎn)卵排精。