[發明專利]一種以敵敵畏為底物的降解菌株的篩選方法

有效

• 申請號: 200810011713.2
• 申請日: 2008-06-06
• 公開（公告）號: CN101597637A
• 公開（公告）日: 2009-12-09
• 發明（設計）人: 張惠文;蔡穎慧;張曉黎;蘇振成;李旭
• 申請（專利權）人: 中國科學院沈陽應用生態研究所
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司
• 代理人: 許宗富;周秀梅

1.一種以敵敵畏為底物的降解菌株的篩選方法，其特征在于：

1)降解菌的富集馴化：將2-4g菌樣接種于含敵敵畏的100-150 mL富集培養基中進行轉接培養，每次轉接培養條件為30-35℃、 150-200r/min搖床培養5-7天，共轉接4-5次，轉接量按體積百分比 計每次培養液8-10％接種于含敵敵畏逐漸增加的100-150ml富集培養 基中，待用；其中敵敵畏每次以100-150mg/L逐漸增加；

2)分離篩選：取步驟1)中培養的菌液馴化液，稀釋10⁴-10⁵后， 涂布于牛肉膏蛋白胨固體平板上，30-35℃恒溫倒置培養3-4天；

3)降解菌復篩：將步驟2)中生長的菌株在含敵敵畏為惟一碳源 的選擇性無機鹽培養基固體平板上劃線分離，30-35℃培養4-5天， 選擇性無機鹽培養基上能夠生長的菌株即為能夠以敵敵畏為唯一碳 源的降解菌株；

所述富集培養基的組成為：MgSO₄·7H₂O?0.20-0.25g，(NH₄)₂SO₄0.50-0.6g，KH₂PO₄?0.50-0.6g，NaCl?1.0-1.2g，K₂HPO₄?1.50-1.6g， 敵敵畏分別為100-500mg，加蒸餾水至1000ml，調pH至7.0-7.5；

所述牛肉膏蛋白胨培養基的組成為：牛肉膏5.0-6.0g，蛋白胨 10.0-11.0g，NaCl?10.0-11.0g，瓊脂15.0～20.0g，加蒸餾水至1000ml， pH＝7.0-7.5；

所述選擇性培養基的配方為：MgSO₄·7H₂O?0.20-0.25g，(NH₄)₂SO₄0.50-0.6g，KH₂PO₄?0.50-0.6g，NaCl?1.0-1.2g，K₂HPO₄?1.50-1.6g， 敵敵畏為300-350mg，瓊脂15.0-20.0g，加蒸餾水至1000ml，調pH 至7.0-7.5。