[發明專利]新型胰島素衍生物及其制備方法

無效

• 申請號: 200810011479.3
• 申請日: 2008-05-20
• 公開（公告）號: CN101298477A
• 公開（公告）日: 2008-11-05
• 發明（設計）人: 何明磊
• 申請（專利權）人: 大連民族學院
• 主分類號: C07K14/62
• 分類號: C07K14/62;C07K1/06;C07K1/107;C12P21/02
• 代理公司: 大連科技專利代理有限責任公司
• 代理人: 于忠晶

1、新型胰島素衍生物，其特征是：其化合物通式為C_nH_2n+1NH-X-D，式中n＝14-22，C_nH_2n+1NH為直鏈飽和脂肪氨基；X為遺傳編碼的脯氨酸以外的天然氨基酸或者一氨基一羧基的非天然氨基酸；D為脫去B30氨基酸殘基的天然豬胰島素或脫去B30氨基酸殘基的人胰島素。

2、根據權利要求1所述的新型胰島素衍生物，其特征是：其中X為L-蘇氨酸。

3、根據權利要求1所述的新型胰島素衍生物，其特征是：其中的C_nH_2n+1NH與X的羧基之間為酰胺鍵連接。

4、根據權利要求1所述的新型胰島素衍生物，其特征是：其中X的氨基與D的C末端B29賴氨酸的羧基之間是酰胺鍵連接。

5、新型胰島素衍生物的制備方法，其特征是：具體合成步驟為：

第一步脂肪胺的制備：將一定量的通式為C_nH_2n+1OH的直連飽和脂肪醇(n＝14-22)加入到甲苯中，加熱共沸除去水分，余下的溶液加入與脂肪醇等摩爾量的吡啶，回流反應并滴加2倍脂肪醇摩爾量的氯化亞砜(SOCl₂)滴加完畢后再于80℃反應2-6小時，冷卻過濾除去結晶物，然后減壓蒸餾除去甲苯，得到的產物為C_nH_2n+1Cl，將該物質放入反應釜中，以少量無水甲醇溶解，然后加入過量的液態氨，密閉下60℃反應12-24小時，開釜后減壓除去過量的氨和甲醇，得到通式為C_nH_2n+1NH₂的脂肪胺(n＝14-22)，備用；

第二步C_nH_2n+1NH-X的制備：取一定量的氨基用Fmoc保護了的氨基酸衍生物，其化學通式為Fmoc-HN-X-(COOH)，X為氨基酸殘基，溶于二氯甲烷(CH₂Cl₂)與二甲基甲酰胺(DMF)的混合溶液中，加入Fmoc-HN-X-(COOH)等摩爾量的備用的C_nH_2n+1NH₂，再加入2倍Fmoc-HN-X-(COOH)摩爾量的碳二亞胺(DCC)，0-10℃攪拌反應12-24小時，然后過濾除去副產物DCU，得到的溶液中加入過量的哌啶，攪拌反應脫掉Fmoc保護基，得到C_nH_2n+1NH-X，備用，此時X的羧基與脂肪胺形成酰胺連接，氨基為游離狀態；

第三步去掉B30氨基酸殘基的胰島素中間體D的制備：在pH8.3的碳酸氫銨溶液中加入天然的豬胰島素或人胰島素，使之溶解，然后加入催化量的羧肽酶A，在37℃水浴中作用2小時，然后加酸終止反應，反應液用SephadexG50分離，凍干，得到脫掉B30氨基酸的胰島素中間體，其B鏈N末端為B29-Lys，備用；

第四步新型胰島素衍生物的制備：首先將一定量備用的脫掉B30氨基酸殘基的胰島素中間體用0.5-2N的醋酸溶液溶解，得溶液1；然后將備用的C_nH_2n+1NH-X溶于無水乙醇與二甲基甲酰胺(EtOH/DMF)的1∶1-1∶6體比積混合溶液中，得溶液2；原料胰島素中間體與C_nH_2n+1NH-X的摩爾比為1∶20-1∶100，最后溶液1和2合并并調節pH至6-7，加入催化量的胰蛋白酶，在20-35℃的水浴中反應12-24小時，即可得到本發明的終產物——B30的氨基酸殘基的羧基被脂肪胺修飾的新型胰島素衍生物。

6、根據權利要求4所述的新型胰島素衍生物的制備方法，其特征是：第一步脂肪胺的制備中滴加吡啶完畢后反應時間為4小時。

7、根據權利要求4所述的新型胰島素衍生物的制備方法，其特征是：第一步脂肪胺的制備中加入液態氨反應時間為18小時。

8、根據權利要求4所述的新型胰島素衍生物的制備方法，其特征是：第二步C_nH_2n+1NH-X的制備反應溫度為4℃，反應時間為18小時。