[發(fā)明專利]一種豬苓多糖精制中的脫色方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810007695.0
• 申請(qǐng)日: 2008-03-07
• 公開（公告）號(hào): CN101525389A
• 公開（公告）日: 2009-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭順星;沈晶晶;陳曉梅;王春蘭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00;C12P19/04
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及一種豬苓多糖精制中的脫色方法。

技術(shù)背景

中藥豬苓是多孔菌科多孔菌屬真菌豬苓[Polyporus?umbellatus(Pers.)Fr.]的干燥菌核，在我國已有2000年的藥用歷史，具有補(bǔ)血滋陰、生津潤燥和利水滲濕等作用。1973年日本首次從豬苓中分離出豬苓多糖，并證明其對(duì)動(dòng)物移植性腫瘤有抑制作用，隨后圍繞豬苓多糖開展了很多研究工作。現(xiàn)已證明，豬苓多糖具有免疫刺激作用，可提高人體免疫力。臨床應(yīng)用豬苓多糖配合乙肝疫苗或干擾素治療乙型肝炎，或佐以化療藥物治療原發(fā)性肺癌、子宮頸癌、鼻咽癌、食道癌和白血病等腫瘤疾病。豬苓多糖能顯著降低肝臟中氧化清除自由基損傷的作用，對(duì)于延緩組織細(xì)胞老化、保護(hù)機(jī)體、抗老防衰十分有益。在我國上世紀(jì)八、九十年代已有豬苓多糖注射液、豬苓多糖膠囊等產(chǎn)品問世，并在臨床及日常保健中廣為應(yīng)用。

目前豬苓多糖主要是從豬苓菌核中提取獲得。豬苓藥用需求的不斷擴(kuò)大以及對(duì)豬苓的采挖缺乏有效的管理，導(dǎo)致其野生資源銳減，已經(jīng)面臨資源瀕危的狀態(tài)。利用蜜環(huán)菌伴栽豬苓菌核的人工栽培方法存在兩方面問題，一是栽培中需要大量豬苓菌核作為種苓，消耗了一部分豬苓的產(chǎn)量；二是栽培豬苓的繁殖率低，生長周期長，產(chǎn)量有限。此外，人工栽培的豬苓容易存在重金屬易超標(biāo)的問題。這些因素造成目前豬苓的藥材產(chǎn)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足日益增長的國內(nèi)外市場(chǎng)對(duì)豬苓的需求。

發(fā)酵工程技術(shù)是通過現(xiàn)代微生物工程技術(shù)進(jìn)行工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的技術(shù)，是大部分生物技術(shù)藥物工業(yè)化生產(chǎn)的關(guān)鍵。采用深層發(fā)酵法培養(yǎng)豬苓，周期短，成本低，產(chǎn)量大，產(chǎn)物質(zhì)量穩(wěn)定，大大提高了豬苓多糖的生產(chǎn)能力。已有研究表明從豬苓菌絲體中提取的多糖和從豬苓菌核中提取的多糖均能提高機(jī)體免疫力。

豬苓粗多糖為深褐色，不利于有效成分的進(jìn)一步純化和保健產(chǎn)品的開發(fā)。目前應(yīng)用于多糖脫色的方法主要有：活性炭吸附、雙氧水氧化、DEAE纖維素柱層析等。H₂O₂脫色效果較好，但脫色耗時(shí)長，反應(yīng)過程可能會(huì)對(duì)多糖結(jié)構(gòu)造成一定影響。DEAE纖維素屬于離子交換纖維素，價(jià)格高于活性炭，能取得較好的脫色效果，但色素洗脫困難，其原因可能是層析介質(zhì)被毒化，逆轉(zhuǎn)困難，難以重新獲得交換能力。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是在豬苓多糖的精制過程中提供一種效率高、成本低、操作簡單、重復(fù)性好的脫色方法。使用該方法處理，不會(huì)影響多糖的生物活性，且多糖的損失小，適合應(yīng)用于大量生產(chǎn)中。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)是先制備豬苓粗多糖，再使用活性炭對(duì)粗多糖溶液進(jìn)行脫色處理。具體地說，本發(fā)明所述的技術(shù)步驟方法如下：

1.粗多糖的制備

豬苓菌粉，可以是豬苓菌核粉以及豬苓固體發(fā)酵和液體發(fā)酵的菌絲體粉，經(jīng)過脫脂處理；脫脂后的干燥菌粉加水提取2-4次，提取溫度為80-100℃，前兩次提取時(shí)間為2-5小時(shí)，提取時(shí)水用量(V)為菌粉重量(W)的5-15倍，第三次及以后提取時(shí)間均為1-4小時(shí)，提取時(shí)水用量(V)為菌粉重量(W)的5-10倍；合并提取液，常壓加熱濃縮或60-90℃減壓濃縮，濃縮液體積(V)為菌粉重量(W)的0.5-4倍，減壓濃縮時(shí)真空度為0.6-0.8；提取濃縮液加入95％乙醇或無水乙醇沉淀多糖，溶劑用量(V)為提取濃縮液體積(V)的3-6倍；分離沉淀部分，以適量水溶解，溶液經(jīng)冷凍干燥，制得粗多糖。

2.粗多糖的脫色

上述方法制備的粗多糖配成0.5-3％的水溶液，向其中加入活性炭的重量(W)為溶液體積(V)的2-4％，溶液于40-70℃下保溫40-60分鐘進(jìn)行脫色處理；過濾去除活性炭；用分光光度法于250nm處分別檢測(cè)脫色前后多糖溶液的吸光度(A)值，脫色后溶液的吸光度(A)應(yīng)不高于脫色前溶液吸光度(A)的1/3。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例：

取豬苓菌核粗粉500g，用5倍體積80％乙醇浸泡過夜，抽濾，藥渣揮干至無醇味，加水于100℃煮提2次，每次4h，提取時(shí)水的用量均為7L。合并兩次提取液，減壓濃縮至0.5L，加入無水乙醇2L至醇終濃度80％，4℃放置過夜，5000rpm離心15min分離沉淀。沉淀以少量去離子水溶解，冷凍干燥，得棕色粗多糖粉末(菌核多糖)7.1g。