[發明專利]表達人CREG的重組腺病毒及其用途

無效

• 申請號: 200810000053.8
• 申請日: 2008-01-04
• 公開（公告）號: CN101475961A
• 公開（公告）日: 2009-07-08
• 發明（設計）人: 韓雅玲;郭亮;鄧捷;康建
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍沈陽軍區總醫院
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;C12N15/12;A61K48/00;A61P9/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 程 泳

技術領域

本發明涉及一種攜帶人E1A激活基因阻遏子(CREG)基因的重組腺 病毒，本發明還涉及所述重組腺病毒用于制備對PCI術后再狹窄具有 明確抑制作用的藥物的用途。

背景技術

經皮冠狀動脈內介入治療(PCI)是目前冠心病治療的主要手段之 一，全球每年有超過280萬的冠心病患者接受PCI治療，但術后 10％^-70％的再狹窄發生率降低了其帶來的益處。在我國，PCI的數量逐 年遞增，再狹窄發生的數量也逐年上升，已經成為一個非常嚴峻的問 題，針對再狹窄的發生，臨床上應用了許多方法來預防其發生發展， 包括抗血栓、調脂、再次PCI、支架植入術、切割球囊、藥物洗脫支 架、血管內放射治療及光動力療法等。但這些方法不能根除再狹窄， 不僅費用昂貴，而且長期效果尚不確定。

基因治療再狹窄越來越顯示出優勢。從基因水平來看，任何疾病 都是由于體內基因發生改變而引起的，將有治療作用的基因通過一定 方式導入人體靶細胞以糾正基因的缺陷可以達到治療疾病的目的，對 于再狹窄的治療也是如此。

E1A激活基因阻遏子(cellular?repressor?of?E1A- activated?genes，CREG)是一種細胞轉錄調控因子，其最早是Gill 等通過酵母雙雜交技術在果蠅cDNA文庫中獲得的可能與TBP轉錄因子 相互作用的蛋白質序列，研究發現其部分氨基酸序列與E1A相同，故 可以直接對抗E1A的激活作用。隨后在人Hela細胞cDNA文庫中克隆 到全長約為2.0kb的人CREG基因的cDNA全長序列(Gill?G.Mol?Cell Biol，1998；18(9)：5032-5041)。文獻檢索發現，CREG蛋白在成熟分 化的組織細胞中廣泛表達，在去分化組織如小鼠胚胎干細胞、人畸胎 瘤細胞卻是低表達的，研究表明CREG具有抑制細胞增殖的作用，提示 其可能對以血管平滑肌細胞(vascular?smooth?muscle?cell，VSMC) 增生為主要病理機制的PCI術后再狹窄防治具有潛在價值[Veal?E. Oncogene.2000；19(17)：2120-2128；Gill?G.Mol?Cell Biol，1998；18(9)：5032-5041；Di?Bacco?A.Oncogene，2003； 22(35)：5436-5445]。本發明人在國際上最先報道了CREG基因對體外 培養和在體損傷后的血管平滑肌細胞增殖具有明顯的抑制作用(Han YL.Zhonghua?yi?xue?za?zhi，2005；85(1)：49-53)，其中介導CREG 基因的載體為逆轉錄病毒載體。

然而，逆轉錄病毒存在以下缺陷：首先，逆轉錄病毒僅能感染增 生期的血管平滑肌細胞，感染效率較低；其次，逆轉錄病毒載體是一 種能夠穩定整合到宿主細胞基因組中并長期穩定表達的載體，因而可 能破壞宿主細胞基因組的穩定性，不具有臨床用藥的可行性；再次， 在防治PCI術后再狹窄的研究中，最理想和最可行的給藥途徑為血管 內給藥，而逆轉錄病毒載體僅適用于通過動脈球囊損傷術后聚醚 (pluronic?F127)載體包裹血管外膜向血管內膜滲透的緩釋方式完成 (因球囊損傷術后血管的血管平滑肌細胞增殖需要一定過程，血管內 的即刻給藥方式是不起效的)，但這種緩釋方式僅適用于動物的實驗 性研究，缺乏臨床應用的可行性。

為克服上述現有技術的缺陷，本發明人采用經修飾的腺病毒作為 載體，構建了攜帶人CREG基因的重組腺病毒，有望用于防治PCI術后 再狹窄的基因治療。

發明內容

本發明的一個方面，涉及一種攜帶人CREG基因的重組腺病毒。 在本發明中，所述CREG基因是指人CREG基因，其序列如SEQ?ID?NO：1 所示(網址為：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez？db ＝Nucleotide，GenBank登錄號NM_00385。具體序列如下所述，方框所 示為CREG起始和終止密碼子)

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