[發(fā)明專利]診斷結(jié)核病的基于結(jié)核桿菌抗原性多肽的組合物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810000021.8
• 申請(qǐng)日: 2008-01-03
• 公開（公告）號(hào): CN101477125A
• 公開（公告）日: 2009-07-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮曉燕;張賀秋;陳坤;宋曉國;王國華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所;上海榮盛生物藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及結(jié)核病的診斷領(lǐng)域。更具體而言涉及使用源于結(jié)核桿菌的 多種抗原性多肽的組合診斷結(jié)核病的領(lǐng)域。

發(fā)明背景

近年來，結(jié)核病死灰復(fù)燃，成為全球關(guān)注的公共衛(wèi)生問題和社會(huì)問題。 據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前全球有肺結(jié)核病人2000萬，新發(fā)病人1000萬，每年死亡人 數(shù)300萬，超過了其它傳染病的總和，成為傳染病的頭號(hào)殺手。

肺結(jié)核顯示出全球性流行病的所有主要特征，并在全世界范圍內(nèi)蔓延。 地球上大約有1/3的人感染結(jié)核桿菌，導(dǎo)致每年800萬例活動(dòng)性肺結(jié)核和 300萬人死亡。結(jié)核桿菌多重藥耐藥株的出現(xiàn)以及合并HIV感染使得形勢(shì) 變得更為嚴(yán)峻。如果不能有效控制，在未來10年內(nèi)，大約有3000萬人會(huì) 因此而喪命，還有9000萬活動(dòng)性結(jié)核新發(fā)病例。結(jié)核如此強(qiáng)大的流行性和 傳染性對(duì)公眾健康來說是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)，人們迫切需要解決這些問題的 方法，然而現(xiàn)存的一些對(duì)抗結(jié)核的策略是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，尤其在診斷方法中 存在著較多問題。

目前結(jié)核病的診斷雖然有多種方法，但都存在這樣或那樣的問題。影 像學(xué)診斷雖然仍是主體，但是它需要其它輔助診斷方法；痰涂片簡單易行， 但陽性率低；痰培養(yǎng)是金標(biāo)準(zhǔn)，但周期太長，不能滿足臨床需要；PCR法 敏感性高、診斷速度快，但存在不穩(wěn)定性；噬菌體裂解法可以檢測活結(jié)核 桿菌，不能檢測非結(jié)核桿菌感染，更加適用于結(jié)核菌抗藥性實(shí)驗(yàn)研究；而 血清學(xué)診斷技術(shù)有其固有的優(yōu)勢(shì)，如操作簡便、快速、易判斷結(jié)果、穩(wěn)定 性好、便于推廣、無需特殊精密儀器等。

對(duì)于結(jié)核病檢測的血清學(xué)檢測，尋找高敏感性和高特異性的抗原成分， 建立高特異性高敏感性的檢測方法是解決結(jié)核病早期快速準(zhǔn)確診斷的關(guān) 鍵。目前越來越多的興趣投向建立一種特異性和靈敏性都比較可靠的血清 學(xué)結(jié)核病診斷方法。傳統(tǒng)上使用的結(jié)核菌素純蛋白衍生物(PPD)所包含的 抗原為致病性分支桿菌、環(huán)境分支桿菌及卡介苗(BCG)所共有，不能明確 區(qū)分BCG免疫、環(huán)境分支桿菌感染和致病性結(jié)核桿菌感染。目前研究的 用于診斷結(jié)核病的最重要的抗原包括38kD抗原、ESAT-6、CFP10、MPT64 等，這些都作為血清學(xué)檢測活動(dòng)性結(jié)核的標(biāo)志物。

38kD抗原是一種脂蛋白和主要免疫原，是目前最為常用的結(jié)核病診斷 抗原之一。38kD抗原是結(jié)核桿菌種特異性蛋白質(zhì)抗原且含量高于BCG10 倍。在用于結(jié)核血清學(xué)檢測時(shí)，該蛋白的敏感性和特異性優(yōu)于其它單一抗 原。有研究證實(shí)用38kD抗原檢測肺結(jié)核病人血清，靈敏度與特異性分別 為65.6％和95.8％(WilKinson等，J?Clin?Microbiol，35(3)：553-557(1997))。

早期分泌性抗原靶(ESAT-6)和培養(yǎng)濾液蛋白10(CFP10)是結(jié)核 病免疫診斷中兩個(gè)很有前途的抗原，具有較強(qiáng)的細(xì)胞免疫活性，在抗結(jié)核 感染的免疫應(yīng)答中起重要作用。這兩個(gè)抗原均由RD1區(qū)編碼，該區(qū)只存在 于致病性結(jié)核桿菌基因組中，所有BCG菌株基因組中均缺乏該區(qū)域 (Mahairas?GG等，Bacteriol，178：1274-1282(1996))。ESAT-6和CFP10 可形成異二聚體結(jié)構(gòu)，聯(lián)合應(yīng)用ESAT-6和CFP10診斷結(jié)核病發(fā)現(xiàn)混合抗 原敏感性較單抗原增加，而不降低其特異性(van?Pinxteren?LAH等，Clin Diagn?Lab?Immunol，7(2)：155-160(2000))。所以，ESAT-6和CFP10有望 成為診斷動(dòng)物和人致病性結(jié)核桿菌感染的特異性抗原。

MPT64是結(jié)核桿菌生長最早分泌的主要蛋白，僅在結(jié)核桿菌及牛型分 支桿菌中存在，而作為疫苗的BCG中則不含。天然的MPT64和重組的 MPT64均可使結(jié)核病人或結(jié)核菌素陽性者產(chǎn)生T細(xì)胞反應(yīng)和皮膚延遲型 (DTH)超敏反應(yīng)。但由于MPT64只存在于結(jié)核桿菌復(fù)合群中，大多數(shù)BCG 菌株缺乏MPT64基因，BCG接種者或環(huán)境分支桿菌感染者(如鳥分支桿菌) 對(duì)MPT64皮膚試驗(yàn)不反應(yīng)。有研究結(jié)果表明，雖然以MPT64蛋白作為抗 原檢測抗結(jié)核抗體的陽性率在各種結(jié)核桿菌分泌性蛋白中是較低的，但如 果與其它蛋白形成融合蛋白則有可能具有較好的穩(wěn)定性(van?Pinxteren LAH等，Clin?Diagn?Lab?Immunol，7(2)：155-160(2000))，因此MPT64 蛋白有希望成為結(jié)核病血清學(xué)診斷的組合抗原的候選者之一。