[發明專利]CTHRC1在肝癌診斷中的應用

有效

• 申請號: 200780052912.1
• 申請日: 2007-05-09
• 公開（公告）號: CN101711281A
• 公開（公告）日: 2010-05-19
• 發明（設計）人: 覃文新;姚根富;萬曉楨;楊勝利;顧健人
• 申請（專利權）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/68;C07K16/18;C07K14/47;C07H21/00;G01N33/532;G01N33/533;G01N33/534;G01N33/574
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陶家蓉

技術領域

本發明涉及分子生物學特別是基因診斷領域，尤其是CTHRC-1蛋白在診斷肝 癌中的應用。

背景技術

肝細胞癌(Hepatocellular?carcinoma，HCC)是世界上發生率和致死率較高 的惡性腫瘤之一，全世界每年新發HCC病人約50％在我國[1]。HCC的發生發展和 惡性轉移機制是一個涉及多基因、多信號通路參與的復雜的網絡調控體系。

哺乳動物CTHRC1(Collagen?triple?helix?containing?1)基因最先是在+對 正常大鼠動脈和球狀損傷動脈的差異表達序列篩選中發現的，它包含一個N端信 號肽、一段36個氨基酸的膠原三螺旋以及一個C端球狀結構域[2]。在人和鼠中， 該基因的氨基酸序列具有92％的同源性[3]。但未見該受體與人肝癌細胞有任何 特異性的關聯。

CTHRC1基因在大鼠動脈的損傷處，重塑的動脈外膜的成纖維細胞和新生內膜 的平滑肌細胞中都有短暫表達。在大鼠成纖維細胞中該基因的高表達會促進細胞 遷移并抑制I型膠原的合成[2]，從而提示CTHRC1通過限制膠原基質沉積和促進 細胞遷移參與了血管的損傷修復.而越來越多的證據表明，組織的修復與腫瘤發生 之間有很緊密的關聯[4-6]。

CTHRC1基因與人類腫瘤的關系首先是在乳腺癌中被報導的，cDNA芯片和原位 雜交發現在乳腺癌的基質細胞中有該基因的mRNA的表達[7，8]。此后又有研究報 導在黑色素瘤中該基因也存在異常表達，并且對癌細胞的侵襲和轉移起作用[3]。 已有許多報道證實，腫瘤微環境在腫瘤細胞的生長、侵襲和轉移中有及其重要的 作用[9-11]。當CTHRC1蛋白在纖維原細胞中表達上調時，可以抑制I型膠原的合 成。CTHRC1可能是通過降低細胞外基質成分的合成，從而為腫瘤細胞的侵襲和轉 移創造合適的細胞外環境。因此，CTHRC1基因可能在癌癥診斷和癌癥轉移復發的 預防和治療上具有良好的應用前景。

因此，本領域對于特定癌癥的準確和特異性的檢測有迫切的需求。

發明內容

因此，本發明的目的是提供能夠準確診斷選自肝癌的診斷試劑盒、CTHRC-1 基因的診斷試劑盒的用途，以及體外檢測其表達量的方法。

在本發明的一個方面，提供了CTHRC1核酸序列或蛋白在制備肝癌診斷試劑或 含有該診斷試劑的試劑盒中的用途。

在該方面的一個優選例中，肝癌診斷試劑是抗CTHRC1蛋白特異性抗體或 CTHRC1蛋白特異性核酸探針。

在本發明的另一個方面，提供了一種檢測肝癌的方法，包括下列步驟：

a)將與放射性核素偶聯的CTHRC1核酸探針輸給動物；

b)檢測所述核酸探針在體內的聚集；

c)所述聚集表明肝癌的存在。

在該方面的一個優選例中放射性核素是α-³²P。在另一個優選例中動物是人。

在本發明的另一個方面，提供了一種肝癌診斷試劑盒，該試劑盒含有容器， 所述容器中含有抗CTHRC1抗體；以及標簽，說明所述試劑盒用于診斷肝癌。

在本發明的還有一個方面，提供了一種肝癌診斷試劑盒，其特征在于，該試 劑盒含有容器，其中含有含有CTHRC1特異性核酸探針；以及標簽，所該簽說明所 述試劑盒用于診斷肝癌。

本發明的另一個方面，提供了一種體外檢測特異性CTHRC1蛋白表達的方法， 包括步驟：

用抗CTHRC1蛋白特異性抗體或CTHRC1特異性核酸探針與細胞樣品反應，以 正常肝細胞為對照；

比較抗體或探針的結合量，其中高于對照的量表明該細胞為肝癌細胞，低于 或等于對照的量表明該細胞為正常細胞。

在該方面的一個優選例中，結合量是通過檢測與探針或抗體偶聯的可檢測基 團測得的。

在該方面的另一個優選例中，所述可檢測基團選自生色團、化學發光基團、 熒光團或同位素。

附圖說明

圖1顯示了CTHRC1在肝癌細胞株中的表達情況。圖1A是肝癌細胞株中的 RT-PCR分析結果。圖1B是對應于圖1A的柱狀圖。