[發(fā)明專利]利用HPLC在制備級(jí)上純化RNA的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200780047133.2 | 申請(qǐng)日： | 2007-12-20 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN101563457A | 公開(kāi)（公告）日： | 2009-10-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 托馬斯·克特雷爾;弗洛里安·馮德米爾貝;拉迪斯勞斯·賴德?tīng)?/a>;托爾斯藤·穆茨克 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 庫(kù)瑞瓦格有限責(zé)任公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/10 | 分類號(hào)： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京康信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 | 代理人： | 吳貴明;張 英 |
| 地址： | 德國(guó)*** | 國(guó)省代碼： | 德國(guó);DE |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 利用 hplc 制備 純化 rna 方法 | ||
1.一種用于在制備級(jí)上純化RNA的方法，其特征在于，利用多 孔反相作為固定相通過(guò)HPLC或低壓或常壓液相色譜法來(lái)純 化所述RNA，其特征在于，所述多孔反相是多孔非烷基化聚 苯乙烯或多孔非烷基化聚苯乙烯二乙烯基苯，所述RNA的大 小為多至15000個(gè)核苷酸或堿基對(duì)，所述反相的孔徑為至
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述RNA選自tRNA、 rRNA、mRNA或RNA變體，所述RNA變體為適體或核酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述RNA是全細(xì)胞RNA。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述RNA的大小 為100至10000個(gè)核苷酸或堿基對(duì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述多孔反相的顆 粒尺寸為8μm至50μm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述多孔反相的顆 粒尺寸為8μm至30μm。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述多孔反相的顆 粒尺寸為8μm至25μm。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述反相的孔徑為 至
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，特征在于，所述多孔反相由珠粒 形成或作為聚合的塊體而存在。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，HPLC柱的長(zhǎng)度為 大于5cm、小于等于100cm，且直徑為大于4mm、小于等于 25mm。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，HPLC柱的直徑為 大于4mm、小于等于100cm。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，HPLC純化以離子 對(duì)方法進(jìn)行，其中將帶有正電荷的離子加入流動(dòng)相中作為帶負(fù) 電荷的所述RNA的反荷離子，或通過(guò)尺寸排阻色譜法、凝膠 過(guò)濾、親和色譜法或疏水作用色譜法來(lái)進(jìn)行HPLC純化。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，針對(duì)洗脫目的，使 用含水溶劑和有機(jī)溶劑的混合物來(lái)進(jìn)行HPLC純化。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述含水溶劑是 緩沖劑。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述緩沖劑是乙 酸三乙銨、三氟乙酸、乙酸、甲酸、乙酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩 沖液、硫酸氫四丁銨、溴化四丁銨以及氯化四丁銨。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，乙酸三乙銨緩沖 劑是0.1M的乙酸三乙銨緩沖液。
17.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑是 乙腈、甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、丙酮或它們的混合物。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑是 乙腈。
19.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相是0.1 M乙酸三乙銨和乙腈的混合物。
20.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相包含 相對(duì)于所述流動(dòng)相為5.0vol.%至25.0vol.%的有機(jī)溶劑，并與 所述含水溶劑構(gòu)成100vol.%。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相包含 相對(duì)于所述流動(dòng)相為7.5vol.%至17.5vol.%的有機(jī)溶劑，并與 所述含水溶劑構(gòu)成100vol.%。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相包含 相對(duì)于所述流動(dòng)相為9.5vol.%至14.4vol.%的有機(jī)溶劑，并與 所述含水溶劑構(gòu)成100vol.%。
23.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，進(jìn)行等度分離。
24.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，進(jìn)行梯度分離。
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