[發(fā)明專利]影響病毒脂質(zhì)的成分

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200780042711.3
• 申請(qǐng)日: 2007-10-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101578362A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: V·特魯翁一勒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 米迪繆尼有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N7/00
• 分類(lèi)號(hào): C12N7/00;C12N7/01
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 韋 東

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求Vu?Truong-Le于2006年10月17日提交的第60/852,571號(hào)在先美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)“影響病毒脂質(zhì)的成分”(Influencing?Viral?Lipid?Constituents)的優(yōu)先權(quán)和權(quán)益。在先申請(qǐng)的完整公開(kāi)通過(guò)引用納入本說(shuō)明書(shū)。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及培養(yǎng)基和具有改良的脂質(zhì)成分的細(xì)胞和病毒的組合物。提供所述細(xì)胞和病毒的方法包括調(diào)節(jié)用于病毒宿主細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基脂質(zhì)，如鞘磷脂、膽固醇、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰膽堿。改良的宿主細(xì)胞可以具有更高的許可性以及更高的病毒培養(yǎng)產(chǎn)量。所獲得的改良的病毒可以更穩(wěn)定并更好地適合生產(chǎn)條件。

發(fā)明背景

細(xì)胞質(zhì)膜包含各種脂質(zhì)(例如磷脂、膽固醇、神經(jīng)鞘脂以及糖脂質(zhì))，但它們不必是均一分布的。例如，雙層膜的內(nèi)表面和外表面膜的脂質(zhì)成分之間具有顯著差異。而且，脂質(zhì)和某些膜蛋白可以形成“筏”或脂質(zhì)微結(jié)構(gòu)域，例如由于具有更多高飽和脂肪酸的特定脂質(zhì)的富集，其中脂質(zhì)排列地比通常膜中更為緊密。膜的脂質(zhì)組成可以充分影響膜的特性。

培養(yǎng)基可以影響動(dòng)物細(xì)胞膜的脂質(zhì)組成。例如，D.Tombaccini等，“生長(zhǎng)在含脂質(zhì)耗盡血清培養(yǎng)基中的Balb/c3T3、SV3T3和刀豆素A選擇性回復(fù)體細(xì)胞的脂質(zhì)組成”(Lipid?Composition?of?Balb/c3T3，SV3T3，and?ConconavalinA-Selected?Revertant?Cells?Grown?in?Media?Containing?Lipid-Depleted?Serum)，J.Lipid?Res.，22：590-597，1981注意到，細(xì)胞在脂質(zhì)耗盡的培養(yǎng)基中在壓力下生長(zhǎng)的情況下，膜脂質(zhì)脂肪酸組成發(fā)生了多種改變。許多這樣的改變與保持脂肪酸缺失飲食的動(dòng)物組織中所發(fā)現(xiàn)的改變類(lèi)似。然而，還不清楚，補(bǔ)充正常的動(dòng)物飼料或細(xì)胞培養(yǎng)基是否會(huì)對(duì)正常的膜脂質(zhì)組成產(chǎn)生顯著變化。

已經(jīng)對(duì)改變包膜病毒的脂質(zhì)組成進(jìn)行了嘗試。例如，A.C.Roland等，“人免疫缺陷病毒包膜和宿主細(xì)胞質(zhì)膜的脂質(zhì)組成和流動(dòng)性”(Lipid?Compositionand?Fluidity?of?the?Human?Immunodeficency?Virus?Envelope?and?Host?Cell?PlasmaMembranes)，PNAS?90：5181-5185，1993發(fā)現(xiàn)，HIV包膜與宿主細(xì)胞膜之間存在差異。Roland注意到，HIV-1與磷脂脂質(zhì)體的孵育降低了包膜中的膽固醇量，導(dǎo)致感染性的顯著降低。

然而，對(duì)于影響宿主細(xì)胞和病毒脂質(zhì)組成的更具有選擇性的方法還存在需求。對(duì)與正常感染和復(fù)制相關(guān)的具體脂質(zhì)和組成型脂肪酸的鑒定可以有益于培養(yǎng)和某些病毒特性的控制。通過(guò)以下論述，可以理解本發(fā)明所提供的這些和其他特征。

發(fā)明概述

本發(fā)明涉及用于調(diào)節(jié)細(xì)胞膜和病毒包膜的脂質(zhì)組成的組合物、方法和系統(tǒng)。宿主細(xì)胞可以在含有補(bǔ)充了某些脂質(zhì)以影響所述細(xì)胞膜中所提供的脂質(zhì)種類(lèi)或亞類(lèi)的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。用于病毒宿主細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基可以影響病毒包膜中的脂質(zhì)特性、影響病毒產(chǎn)量并影響病毒的物理性質(zhì)。

改變病毒脂質(zhì)組成的方法可以包括，例如，調(diào)節(jié)用于培養(yǎng)適合所述病毒的宿主細(xì)胞的培養(yǎng)基中的磷脂或膽固醇的水平，以及用所述病毒感染所述宿主細(xì)胞。由此，與沒(méi)有進(jìn)行這些培養(yǎng)基脂質(zhì)濃度調(diào)節(jié)的情況下在相同宿主細(xì)胞上生長(zhǎng)的相同(對(duì)照)病毒相比，可以為子代病毒粒提供不同的脂質(zhì)組成。通過(guò)本方法進(jìn)行調(diào)節(jié)的典型病毒包括例如逆轉(zhuǎn)錄病毒(諸如HIV)、副粘病毒(諸如呼吸道合胞病毒、副流感病毒、偏肺病毒)、正粘病毒(諸如感冒病毒)、乳多空病毒(如人乳頭狀瘤病毒)、線狀病毒、痘病毒、皰疹病毒、嗜肝DNA病毒、棒狀病毒(如狂犬病毒)、冠狀病毒(如SARS)、囊膜病毒、沙粒病毒和布尼亞病毒。