[發明專利]飽和分析方法

無效

• 申請號: 200780041822.2
• 申請日: 2007-11-09
• 公開（公告）號: CN101553729A
• 公開（公告）日: 2009-10-07
• 發明（設計）人: 道格拉斯·羅伯特·艾文斯;杰拉德·約翰·阿蘭;卡羅林·珍妮弗·拉德
• 申請（專利權）人: 平臺診斷有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 張 穎;樊衛民

發明領域

本發明涉及用于在樣品中檢測被分析物的改進的分析方法。具體 來說，本發明涉及分析裝置，含有用于執行這樣的分析的工具的試劑 盒以及，在被分析物與被分析物類似物之間對被分析物結合試劑上的 結合位點的結合競爭性的基礎上，用于在樣品中檢測被分析物的分析 方法。

發明背景

結合分析是用于在樣品中檢測和定量被分析物的已被確立的技 術。它們對于在生物學樣品中檢測和/或測量物質，以作為疾病診斷和 預后的輔助工具、以及用于預測患者對療法的反應，是特別有用的。 它們通常采取各種不同格樣(format)的免疫分析的形式，其中被分析 物結合試劑是抗體或其功能片段。

大部分這樣的分析方法是基于雙位點的或“三明治”格樣，它對 于能夠同時結合兩種或兩種以上抗體或受體的被分析物是非常有用 的，但是不適合用于半抗原(半抗原由于其大小，通常在一個時候只 能結合一個抗原)。對于半抗原分析來說，通常需要使用典型情況下 用于抗原-抗體分析的飽和類型的分析方法。在這些分析方法中，樣品 被分析物與固定量的試劑被分析物(或被分析物類似物，它已經被化 學修飾，使得它是例如可檢測的或固定化的)競爭被分析物結合試劑 (例如抗體)上有限數量的結合位點。在飽和分析方法中，被分析物 和被分析物類似物的總數量大于被分析物結合試劑上結合位點的總數 量。

這些分析方法可以是直接競爭格樣(其中樣品被分析物、類似物 和被分析物結合試劑同時進行反應)，也可以是間接競爭格樣(其中 允許樣品被分析物和被分析物結合試劑首先在一起相互作用，然后再 與被分析物類似物反應)。后一種格樣也被稱為順序分析法或返滴定 分析法。競爭分析一般使用帶有可檢測的信號基團的被分析物類似物 和未標記的抗體(通常連接到固相上)。密切相關的1-位點免疫測定 格樣通常使用用可檢測基團標記的抗體和固定化在固相上的被分析物 類似物。

因此，與被分析物結合試劑結合的被分析物類似物的量將與樣品 中被分析物的量成反比，通過檢測結合的被分析物類似物的量(對于 競爭分析來說)或結合的被分析物結合試劑的量(對于1-位點免疫測 量分析來說)，可以確定樣品中被分析物的存在和/或量。檢測信號的 降低比來自與陰性背景的檢測信號的增加更困難，通常會導致損失靈 敏性，特別是如果檢測是通過目測的話。測量游離的或未結合的信號 克服了這個問題，但是通常情況下游離的級份存在于較大體積中并且 是擴散的，這又會導致損失靈敏性。

對于靠近患者進行的分析方法存在著不斷增長的需求，這主要是 為了縮短提供結果所需的時間。這樣的分析方法被稱為床旁分析 (Point-of-Care?assays)，一般要求執行起來簡單耐用，因為它們是在 非實驗室的背景下，通常由非專業人員來進行的。理想情況下，它們 應該是完全自足的，不需要輔助的設備(讀數裝置可能例外)。如果 要有任何臨床用途，床旁分析必需與基于實驗室的分析方法具有相似 的靈敏度。但是，常規的免疫分析方法通常包含了復雜的方案和檢測 系統，意味著它們通常不適合于床旁類型的應用。

已經開發了特定的床旁分析方法。最常用的是側向流分析。通常， 這些方法是基于標記的流動成分(例如有色顆粒標記的抗體)、固定 化的成分(例如抗體條或點)以及膜，通過毛細作用使樣品通過膜移 動。在存在被分析物的情況下，在固定化的抗體捕獲區形成了“三明 治”，導致發展出有色的線或點。常規的側向流分析方法示例在例如 美國專利5,656,503中(聯合利華專利控股B.V)。這些分析方法規定 了固定化的抗體捕獲區，盡管它在側向流格樣中與Geigel等(1982，Clin Chem?28：1894)中教導的徑向格樣不同。

對基本的側向流格樣進行了修改，以便能夠進行競爭類型的分析。 這樣修改過的側向流分析方法可以基于標記的流動成分(例如有色顆 粒標記的抗體)、固定化的成分(例如條或點形式的被分析物類似物) 以及膜，通過毛細作用使樣品通過膜移動。在不存在被分析物的情況 下，抗體標記的顆粒將與固定化的被分析物類似物結合，導致顯出有 色的線或點，在存在被分析物的情況下，抗體上的結合位點將被占據， 使得顆粒標記的抗體的結合被減少或完全破壞，同時伴隨著顏色減少 或完全消失。這樣的分析方法由例如Biosite(US?5,143,852)教導。但 是，如上所述，檢測顏色的減少可能是有問題的。