[發明專利]篩選改變皮膚和/或頭發色素沉著的化合物的方法

無效

• 申請號: 200780028600.7
• 申請日: 2007-05-30
• 公開（公告）號: CN101657720A
• 公開（公告）日: 2010-02-24
• 發明（設計）人: W·費爾塞爾;R·S·金格爾;M·R·格林;C·D·賈曼;R·M·奧博恩;P·P·M·施內特坎普;S·威爾遜
• 申請（專利權）人: 荷蘭聯合利華有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N33/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉 玥;黃可峻

1.一種鑒定化合物的方法，所述化合物提高或降低皮膚和/或毛發 色素沉著、或改變皮膚和/或毛發的黑色素組成，所述方法包括測定測 試化合物調節NCKX介導的鈣離子跨膜運動的能力。

2.權利要求1的方法，包括使包含NCKX分子或其變體、融合體或 衍生物的膜暴露于測試化合物，并直接或間接地測量所述膜的一側或 兩側的鈣離子濃度的步驟。

3.權利要求1或2的方法，包括以下步驟：

(a)提供包含至少一種NCKX分子或其功能等效的變體、融合體或 衍生物的膜，其中所述膜分割了兩個不同的區室；

(b)在暴露于一種或多種測試化合物之前測量兩個區室中的鈣離 子(Ca²⁺)濃度；

(c)使所述膜暴露于一種或多種測試化合物；

(d)在暴露于一種或多種測試化合物之后測量兩個區室中的鈣離 子(Ca²⁺)濃度；

(e)通過比較步驟(b)和步驟(d)中測量的濃度來鑒定鈣離子(Ca²⁺) 跨膜運動的數量；

4.前述權利要求中任一項的方法，其中所述NCKX分子是NCKX5。

5.權利要求3或4的方法，進一步包括與對照測量比較響應于測試 化合物的鈣離子運動的步驟。

6.權利要求3、4或5中的方法，進一步包括以下步驟：

(f)重復上述步驟(a)、(b)、(d)和(e)來提供沒有暴露于 一種或多種測試化合物時鈣離子(Ca²⁺)濃度改變的對照結果；

(g)比較在暴露于所述測試化合物之后在步驟(e)中鑒定的鈣離 子(Ca²⁺)跨膜運動的數量、在步驟(f)的對照中鈣離子(Ca²⁺)跨 膜運動的數量；

(h)鑒定鈣離子(Ca²⁺)跨膜運動的數量是否響應于對所述測試化 合物的暴露而提高、降低或保持相同。

7.權利要求3、4或5的方法，進一步包括比較跨越不含NCKX蛋白 的對照膜的鈣離子運動數量的步驟。

8.前述權利要求中任一項的方法，其中鈣離子(Ca²⁺)跨膜運動 的數量的提高表明所述測試化合物提高皮膚和/或毛發色素沉著，鈣離 子(Ca²⁺)跨膜運動的數量的降低表明所述測試化合物降低皮膚和/或 毛發色素沉著。

9.前述權利要求中任一項的方法，進一步包括以下步驟：

(i)分離所述一種或多種測試化合物。

10.權利要求9的方法，進一步包括以下步驟：

(j)將步驟(i)中分離的所述一種或多種測試化合物配制到化妝品 或藥物制劑中。

11.前述權利要求中任一項的方法，其中所述膜是生物膜。

12.權利要求11的方法，其中所述生物膜是細胞膜。

13.權利要求12的方法，其中所述細胞膜是完整細胞的部分。

14.權利要求12或13的方法，其中所述細胞膜和/或完整細胞選自 倉鼠胚腎(HEK)細胞、擊掌昆蟲細胞、酵母細胞、盤基網柄菌細胞、 煙草植物細胞、p53缺陷細胞系H1299和/或細菌。

15.前述權利要求中任一項的方法，其中所述NCKX分子天然地位 于所述膜中、人工地靶向所述膜、或重構在人工的膜中。

16.權利要求15的方法，其中通過連接將多肽靶向或包括在膜中的 前導序列和/或標記來將所述NCKX人工地靶向所述膜。

17.權利要求16的方法，其中所述前導序列來自NCKX2或4、酵母 α配偶因子、NCX蛋白、TGFbeta、血細胞凝集素或病毒表面蛋白。

18.權利要求17的方法，其中所述前導序列是hsNCKX2的N末端序 列(氨基酸1到120)。