[發(fā)明專利]用于檢測(cè)人和禽類流感病毒的核酸引物及探針

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200780015178.1
• 申請(qǐng)日: 2007-04-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101460632A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·德特默;C·E·布什-多諾文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西門子醫(yī)療保健診斷公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12P19/34;C07H21/04
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 郭文潔;林 森

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)根據(jù)35U.S.C.§119(e)主張于2006年4月28日提 交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)60/795,785的優(yōu)先權(quán)，其內(nèi)容全部整合在本文 中。

技術(shù)領(lǐng)域

概括地說(shuō)，本發(fā)明涉及用于檢測(cè)人和禽類流感病毒的診斷 檢測(cè)法的核酸序列。更具體地，本發(fā)明涉及特異檢測(cè)禽流感A (“INFA”)病毒亞型和人INFA及流感B(“INFB”)病毒株的引 物和探針。所述序列可用于在單重檢測(cè)中檢測(cè)樣品中的流感病毒，或 用于在多重檢測(cè)中對(duì)樣品中的流感病毒以及其它呼吸道疾病相關(guān)的 流感病毒進(jìn)行檢測(cè)。

發(fā)明背景

共有三種類型的流感病毒：INFA、INFB和流感病毒C (“INFC”)。毒性最大的流感病毒是流感病毒A，它可以感染人、 鳥(niǎo)、豬、馬、海豹、鯨及其它動(dòng)物。以野生鳥(niǎo)類作為天然宿主的流感 病毒被稱為禽流感病毒，而以人為天然宿主的流感病毒被稱為人流感 病毒。經(jīng)馴養(yǎng)的鳥(niǎo)類，例如火雞和家雞，可因禽流感病毒導(dǎo)致致命的 病害，通過(guò)與感染的馴養(yǎng)鳥(niǎo)類接觸而感染了禽流感病毒的其它動(dòng)物和 人類也是如此。馴養(yǎng)的鳥(niǎo)類可通過(guò)與感染的野生鳥(niǎo)類、其它感染的動(dòng) 物的直接接觸、與含病毒的表面、或污染的食物或水的接觸而被禽 流感病毒感染。迄今為止，那些具有交叉種而且可感染人的禽流感病 毒是近來(lái)人流感大流行的原因。通常僅感染人的流感B和流感C病毒的 毒性小于流感A。流感B病毒是流感在局部地區(qū)流行的原因，而不是造 成世界范圍內(nèi)流感流行的原因。毒性最弱的流感C病毒從來(lái)沒(méi)有造成 過(guò)任何世界范圍內(nèi)人流感的流行。

流感病毒是一種基因組含有8個(gè)單鏈負(fù)義RNA節(jié)段的有包 膜病毒。病毒包膜具有宿主來(lái)源的脂雙層，脂雙層含有兩種主要的表 面病毒糖蛋白：血凝素(“HA”)和神經(jīng)氨酸酶(“NA”)，它們 是負(fù)責(zé)病毒附著的蛋白。在包膜中，基質(zhì)蛋白M1和核蛋白(“NP”) 保護(hù)病毒的RNA。流感病毒的A、B及C型命名是基于M1基質(zhì)蛋白和 NP的抗原特性。8個(gè)RNA節(jié)段編碼至少10種病毒蛋白：節(jié)段1、2和3 編碼三種病毒聚合酶蛋白；節(jié)段4編碼HA；節(jié)段5編碼NP；節(jié)段6編碼 NA；節(jié)段7編碼M1和M2基質(zhì)蛋白，其中前者具有離子通道活性，包 埋在病毒包膜中；片段8編碼非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和NS2，其中前者阻斷宿 主的抗病毒應(yīng)答，而后者參與病毒顆粒的組裝。

通過(guò)病毒表面的HA和NA蛋白的亞型可鑒定INFA病毒。 INFA病毒有16種不同的HA亞型和9種不同的NA亞型，所有這些亞型 均以多種不同組合存在于病毒表面；因此，H5N1病毒在其表面具有 HA5蛋白和NA1蛋白。所有INFA病毒的亞型均在鳥(niǎo)類中發(fā)現(xiàn)。一般在 人類中發(fā)現(xiàn)的INFA亞型是H1、H2和H3亞型(H2亞型通常不傳播)， 以及也已知可感染人的H5、H7和H9亞型。在鳥(niǎo)類中發(fā)現(xiàn)的INFA病毒 中，H5和H7亞型是毒性最大的；H5和H7亞型的病毒株可進(jìn)一步分為 低致病性禽流感(“LPAI”)或高致病性禽流感(“HPAI”)。HPAI 的特征是HAs對(duì)多種廣泛存在于細(xì)胞器和器官系統(tǒng)中的細(xì)胞蛋白酶的 切割高度敏感；相反，LPAIs需要特定的有活性的細(xì)胞外蛋白酶、例 如限制在呼吸腔和腸內(nèi)的胰蛋白酶才可進(jìn)行切割。在感染HPAI?H5或 H7病毒的馴養(yǎng)鳥(niǎo)類中，90％到100％的鳥(niǎo)類將死亡。由于LPAI?H5和 H7病毒可分別進(jìn)化為HPAI?H5和H7病毒，因此LPAI?H5和H7病毒在馴 養(yǎng)鳥(niǎo)群中的爆發(fā)也必須被嚴(yán)密監(jiān)控。在動(dòng)物和人類中傳播的禽流感病 毒的亞型包括H7N7和H3N8病毒，它們可在馬中導(dǎo)致疾病，還有H1N1、 H1N2和H3N2病毒，它們通常在人類中傳播。INFB和INFC病毒未根據(jù) 亞型進(jìn)行分類。

自從1997以來(lái)，以前只感染鳥(niǎo)類的INFA病毒開(kāi)始感染人， 并具有致命后果。已在1997(H5N1，香港)、1999(H9N2，中國(guó)大 陸和中國(guó)香港)、2002(H7N2，美國(guó)維吉尼亞)、2003(H5N1， 中國(guó)大陸和中國(guó)香港；H7N7，荷蘭；H9N2，香港；H7N2，美國(guó)紐約)； 2004(H5N1；泰國(guó)和越南；H7N3，加拿大)；及2005(H5N1，泰 國(guó)和越南)年報(bào)道了確切的造成人員死亡的禽流感病毒的爆發(fā)。

由于禽IFNA病毒被遷徙的鳥(niǎo)類攜帶到全世界，并且已知病 毒可通過(guò)抗原性漂移和變異及遺傳漂變而快速變異，因此用于監(jiān)測(cè)禽 流感病毒的方法必須具有足夠的特異性來(lái)檢測(cè)抗原性和遺傳性多變 的流感病毒株。