[發(fā)明專利]肺結(jié)核疫苗

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200780010366.5
• 申請(qǐng)日: 2007-03-14
• 公開（公告）號(hào): CN101405386A
• 公開（公告）日: 2009-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 卡洛斯·馬丁蒙塔涅斯;布里吉特·吉?jiǎng)P爾;埃斯特·佩雷斯埃朗;熱蘇斯·貢薩洛阿森西奧;艾因霍阿·阿韋斯阿里瓦斯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 薩拉戈薩大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A61K39/04;C12R1/32
• 代理公司: 北京康信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 章社杲;李丙林

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種屬于分枝桿菌(Mycobacterium)屬的分離微生物，其特征在于，其包括賦予PhoP-表型的Rv0757基因的失活和防止DIM產(chǎn)生(DIM-表型)的第二基因的失活。另外，本發(fā)明包括使用所述微生物制備用于免疫或預(yù)防肺結(jié)核的疫苗的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

現(xiàn)在已經(jīng)證實(shí)，使用疫苗來(lái)預(yù)防人類肺結(jié)核成為將近一個(gè)世紀(jì)以來(lái)的巨大挑戰(zhàn)。來(lái)源于牛分枝桿菌(M.bovis)的卡介苗(BCG)是目前唯一在使用的肺結(jié)核疫苗并且是世界范圍內(nèi)使用最廣泛的疫苗。自20世紀(jì)20年代開始，BCG疫苗的發(fā)展和普遍使用呈現(xiàn)顯著的進(jìn)步，具有能夠?qū)⒎谓Y(jié)核從世界根除的前景。但是，這些最初的希望并沒有實(shí)現(xiàn)，而且由大量的效力試驗(yàn)的結(jié)果可以清楚，在這種疾病已成為地方性疾病的第三世界地區(qū)中，現(xiàn)有形式的BCG疫苗在控制疾病、特別是成年人呼吸形式的疾病中的使用是有限的[4]。隨著對(duì)結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)的毒性和導(dǎo)致保護(hù)性免疫產(chǎn)生的免疫反應(yīng)模式的越來(lái)越多的了解，使得開發(fā)優(yōu)于BCG的疫苗成為可能。當(dāng)對(duì)宿主接種BCG時(shí)可獲得較高的保護(hù)水平，這一發(fā)現(xiàn)表明存活力和持久力是肺結(jié)核疫苗成功所必需的基本特性。在本發(fā)明中，我們使用具有失活的Rv0757(phoP)基因和phoP的第二獨(dú)立突變(其防止DIM的合成)的結(jié)核分枝桿菌菌株作為原型單劑量活疫苗，而且我們已指出，它在免疫低下的SCID小鼠?中比BCG更能被減毒，且在小鼠中產(chǎn)生的保護(hù)水平與BCG所產(chǎn)生的相當(dāng)，并且在豚鼠中產(chǎn)生比BCG更高的保護(hù)。?

phoP基因和phoR一起形成的雙組分系統(tǒng)的部分，表現(xiàn)出與控制胞內(nèi)病原體的關(guān)鍵毒力基因轉(zhuǎn)錄的其它雙組分系統(tǒng)的高度相似性。它還控制許多其它并非直接參與毒力的基因表達(dá)[19]。去除毒力基因本質(zhì)上似乎并不是結(jié)核分枝桿菌減毒的唯一方法。已經(jīng)表明，不能重新合成泛酸的結(jié)核分枝桿菌的泛酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變體，在SCID小鼠中持續(xù)存在，但不會(huì)導(dǎo)致疾病發(fā)生[17]。單獨(dú)的亮氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型，其毒力也被大大減弱且不能在SCID小鼠中進(jìn)行體內(nèi)復(fù)制[28]。因此，現(xiàn)在普遍接受這樣的原則：基于結(jié)核分枝桿菌的疫苗株可成功地被減毒，同時(shí)保留在牛分枝桿菌BCG中被抑制的基因。?

過去，對(duì)于比BCG更有效的疫苗的研究基于這樣的觀念：BCG毒力的喪失本質(zhì)上是促進(jìn)其完全保護(hù)效力缺失的一個(gè)因素[32]。因此推論為：結(jié)核分枝桿菌的新型減毒突變體，具有較少的毒力，可能成為更加有效的疫苗。然而，近期的研究顯示，自然感染結(jié)核分枝桿菌和接種BCG在其產(chǎn)生抗肺結(jié)核的保護(hù)性免疫的能力上沒有差異[34]。這提出了關(guān)于是否可能通過結(jié)核分枝桿菌的合理減毒來(lái)改良BCG的問題。在這種情況下，發(fā)現(xiàn)在SCID小鼠模型中，具有兩個(gè)獨(dú)立突變(1.-PhoP蛋白質(zhì)合成和2.-DIM合成)的組合的本發(fā)明的突變結(jié)核分枝桿菌菌株，即使當(dāng)以高于BCG10倍的劑量使用時(shí)，相比BCG也更能被減毒，并且在豚鼠模型中具有比BCG更高的保護(hù)程度，這些發(fā)現(xiàn)特別出乎預(yù)料并且具有重要的意義。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)方面涉及一種屬于分枝桿菌屬的分離微生物，其特征在于包括Rv?0757(phoP)基因的失活和防止DIM(phthiocerol?dimycocerosates)產(chǎn)生的第二基因的失活。在下文中，該分離微生物將被稱為本發(fā)明的微生物。?

本發(fā)明的第二個(gè)方面涉及一種屬于分枝桿菌屬的分離微生物，其特征在于包括，使Rv?0757(phoP)基因和防止DIM產(chǎn)生的phoP的第二獨(dú)立突變失活。在本發(fā)明的優(yōu)選方面中，所述的第二突變是在Rv2930(fadD26)基因中，包括DIM合成所必需的fadD26基因的缺失。?

本發(fā)明的第三個(gè)方面涉及使用本發(fā)明的分離微生物來(lái)制備用于預(yù)防動(dòng)物肺結(jié)核、并且更加優(yōu)選地用于預(yù)防人類肺結(jié)核的疫苗的應(yīng)用，以及肺結(jié)核疫苗目前在治療人類疾病如膀胱癌中所具有的其它用途。?