[發明專利]鑒定至少兩組微生物的方法

有效

• 申請號: 200780007132.5
• 申請日: 2007-02-23
• 公開（公告）號: CN101395278A
• 公開（公告）日: 2009-03-25
• 發明（設計）人: A·詹姆斯;S·歐倫加;J·佩里;C·羅杰－達爾伯特
• 申請（專利權）人: 生物梅里埃公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12N1/20;C12Q1/37;C12Q1/42;C12Q1/44
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 林曉紅

本發明涉及一種鑒定至少兩組表達相同酶活性的微生物的方法。本發明還涉及一種特異性反應培養基和其在鑒定至少兩組表達相同酶活性的微生物中的用途。?

多年來，特異性酶底物用于測定代表微生物特征的酶活性的存在或者缺失。這些酶底物通常由兩部分組成，第一部分對待測的酶活性特異，也稱為靶部分，第二部分作為標記，也稱為標記部分，例如當底物被水解時誘導菌落的特異性顯色或者出現可迅速檢測的沉淀。通過選擇這些底物，根據是否存在反應例如不同的顯色就可以表征微生物的性質或者辨別不同組的微生物。因此，就細菌而言，大腸桿菌(Escherichia?coli)菌株通常通過顯示糖苷酶(osidase)類型的酶活性來揭示，例如β-葡糖醛酸糖苷酶或者β-半乳糖苷酶活性。類似地，利斯特氏菌(Listeria)屬可以通過顯示β-葡糖苷酶活性來檢測。提及的還包括特別用于顯示沙門氏菌(Salmonella)屬的酯酶活性檢測。事實上，沙門氏菌屬具有能夠水解顯色底物例如indigogéniques、合成底物的非特異性酯酶。就沙門氏菌的檢測而言，更寬泛的就具有酯酶活性的細菌而言，通常在瓊脂培養基上進行這些細菌的檢測和/或鑒定，這允許檢測和/或鑒定菌落，所述菌落被懷疑是具有酯酶活性的細菌。?

但是，考慮到另一組微生物，單一的酶活性并不總是足以表征一組特異的微生物。例如，如果期望區分革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌，例如KES組(克雷伯氏桿菌屬(Klebsiella)，腸桿菌屬(Enterobacter)和沙雷氏菌屬(Serratia)，革蘭氏陰性細菌)細菌和腸球菌屬(Enterococcus)(革蘭氏陽性細菌)細菌，必須檢測數種酶的活性以便提高特異性。然后建議在相同的培養基中組合數種酶底物，這可能導致成本高昂。此外，在某些情況下，在相同反應培養基中不可能自發地顯示不同的活性，因為用于表達不同活性的條件是不相容的。因此，當使用bioMérieux出售的顯色培養基CPS?ID?3時，通過糖苷酶活性(β-葡糖苷酶)檢測的KES組細菌(克雷伯氏桿菌，腸桿菌和沙雷氏菌，革蘭氏陰性細菌)與腸球菌屬細菌(革蘭氏陽性細菌)類似，生成藍綠色菌落：這兩組的鑒別必須利用其他步驟確認，通過顯微鏡檢查。?

本發明通過提供一種尤其適于特異鑒定和鑒別不同組微生物的新方法，以快速、廉價和便于實現的方式解決現有技術存在的問題。?

令人驚訝地，本發明人證實通過明智選擇特異于兩組微生物表達的酶活性的底物組合，有可能區分表達相同酶活性的兩組微生物。?

在進一步公開本發明前，給出下列定義以有利于理解本發明：?

為本發明目的，術語微生物涵蓋革蘭氏陽性或者革蘭氏陰性細菌，酵母和更寬泛的，通常是憑肉眼看不見的可以在實驗室中被擴增或者操縱的單細胞生物體。?

就革蘭氏陰性細菌來說，可以提及的是下列屬的細菌：假單胞菌(Pseudomonas)，埃希氏菌(Escherichia)，沙門氏菌(Salmonella)，志賀氏菌(Shigella)，腸桿菌(Enterobacter)，克雷伯氏菌(Klebsiella)，沙雷氏菌(Serratia)，變形菌(Proteus)，彎曲桿菌(Campylobacter)，嗜血菌(Haemophilus)，摩根氏菌(Morganella)，弧菌(Vibrio)，耶爾森氏菌(Yersinia)，不動桿菌(Acinetobacter)，布蘭漢氏球菌(Branhamella)，奈瑟氏球菌(Neisseria)，伯克霍爾德氏菌(Burkholderia)，檸檬酸桿菌(Citrobacter)，哈夫尼菌(Hafnia)，愛德華氏菌(Edwardsiella)，氣單胞菌(Aeromonas)，莫拉氏菌(Moraxella)，巴斯德氏菌(Pasteurella)，普羅威登斯菌(Providencia)，放線桿菌(Actinobacillus)，產堿菌(Alcaligenes)，博德特氏菌(Bordetella)，西地西菌(Cedecea)，歐文氏菌(Erwinia)，泛菌(Pantoea)，雷爾氏菌(Ralstonia)，寡養單胞菌(Stenotrophomonas)，黃單胞菌(Xanthomonas)和軍團菌(Legionella)。?