[發明專利]促創傷愈合因子的純化與應用

無效

• 申請號: 200780002912.0
• 申請日: 2007-01-25
• 公開（公告）號: CN101374855A
• 公開（公告）日: 2009-02-25
• 發明（設計）人: 安德烈亞·內塞爾－斯瓦埃;斯特凡·溫厄;安娜·米耶德斯坦
• 申請（專利權）人: 奧克塔法馬股份有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/18;C07K1/22;C07K1/34;C07K1/36;A61K38/17;A61K38/18;A61K38/36;A61K35/14;A61P17/02
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司
• 代理人: 劉曉東;彭鯤鵬

本發明涉及一種血漿來源的促創傷愈合因子(factor?for?supporting wound?healing)的純化和應用的方法。本發明的具體方面包括純化和在體 內和體外保護所述分子免遭降解的方法。

背景技術

HGF是一種促創傷愈合因子，它是一種在間充質細胞(例如肺巨噬細 胞和成纖維細胞，肝中的枯否細胞，以及白細胞)中表達的蛋白。HGF是 一種細胞因子，它在細胞損傷時分泌并表現出對某些器官再生和創傷愈合 是重要的。從化學角度看，HGF是一種糖蛋白，它首先以天然(無活性) 的前體形式合成。該前體在受損器官中通過特定活化子被切割成活性 HGF。HGF和其他一些因子與肝素結合，這似乎對HGF的激活和它與其 受體的結合很重要。結合HGF的受體是c-MET。由于c-MET受體只在受 損器官中被下調，所以看來只有這些受損器官中的細胞響應于HGF-受體 相互作用。具有肝素結合親和性的生長因子家族中這類影響創傷愈合過程 的因子的實例還包括：血小板衍生生長因子(Platelet?derived?growth factor，PDGF)，表皮生長因子(Epidermal?growth?factor，EGF)，轉化 生長因子α(Transforming?growth?factor?alpha，TGF-α)，轉化生長因子 β(Transforming?growth?factorbeta，TGF-β)，胰島素樣生長因子(Insulin like?growth?factor，IGF-I)和成纖維細胞生長因子(Fibroblast?growth factor，FGF)。

抗凝血酶III(AT-III)是一種血漿糖蛋白，它可以抑制凝血級聯過 程中絲氨酸蛋白酶，因此，在凝血調控中起重要作用。AT-III是因子IXa、 Xa、XI、XIIa和凝血酶的抑制劑。因此，AT-III在凝血級聯的不同階 段調控凝塊的形成。血液中AT-III含量的輕微減少與血栓栓塞風險的增 加相關。AT-III濃縮物被用于在獲得性或遺傳性AT-III缺乏患者中預防 和治療血栓栓塞疾病。另外，已有報道表明AT-III還參與許多其它生物 學反應，例如血管發生和炎癥反應。但AT-III在這些機制中的作用尚未 完全弄清。

以肝素作為固定相結合配基，采用親和色譜純化AT-III的方法是本 領域已知的。Miller-Andersson等(Thrombosis?Research?5，439-452， 1974)發表了使用肝素-瓊脂糖凝膠純化人AT-III的方法。包括離子交 換和凝膠過濾色譜法的整個過程提供34％的得率。

富含組氨酸的糖蛋白(Histidine-rich?glycoprotein，HRGP)是一種 單鏈血漿蛋白，最早于1972分離得到。HRGP確切的生理功能仍舊未 知。由于它與肝素、纖維蛋白原和纖維蛋白、纖溶酶原和活化血小板的 相互作用，HRGP被認為是凝血和纖溶的調節因子(Koide，T.In： Fibrinolysis：Current?Prospects.Gaffney，PJ(Ed.)，John?Libbey?&?Co.， London?1988，p.55-63)。該多肽鏈由507個氨基酸殘基組成，其包含與 其他血漿蛋白(如AT-III)同源的區域(Koide，T.et?al.(1986) Biochemistry?25，2220-2225)。

發明內容