[實(shí)用新型]一種鉑類抗癌藥敏感性相關(guān)基因檢測試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200720183951.2
• 申請日: 2007-09-30
• 公開（公告）號: CN201107261Y
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬勝林;蘇丹
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省腫瘤醫(yī)院
• 主分類號: G01N21/00
• 分類號: G01N21/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型屬生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種鉑類抗癌藥敏感性相關(guān)基因檢測試劑盒，是通過利用SYBR?GREEN?I熒光定量PCR，檢測腫瘤組織中鉑類抗癌藥敏感性相關(guān)基因，切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因(ERCC1)的mRNA表達(dá)水平的試劑盒。

技術(shù)背景

化療是惡性腫瘤治療的重要手段之一。但目前大多數(shù)實(shí)體腫瘤的化療效果并不理想，達(dá)不到預(yù)期目的。由于腫瘤患者對化療的反應(yīng)各異，對化療藥物的敏感性亦存在差異，而臨床醫(yī)生往往僅憑經(jīng)驗(yàn)對不同腫瘤患者使用同一種化療藥物或同一套化療方案，顯然帶有一定的盲目性。臨床化療的成敗對腫瘤患者的治療和提高生存期有著舉足輕重的影響。因此，臨床上迫切需要有切實(shí)可行的檢測方法，在化療前篩選出針對性強(qiáng)、毒副反應(yīng)較小且敏感的化療藥物，進(jìn)行個體化治療，以提高治療效果，減少不必要的不良反應(yīng)，防止耐藥的發(fā)生。

20世紀(jì)50年代Back&Speer首先提出抗腫瘤的個體化治療思想。單憑經(jīng)驗(yàn)用藥有效率僅14％左右，倘若能根據(jù)現(xiàn)有的藥敏測試方法指導(dǎo)選藥，其療效可提高至28％～35％，并可減少藥物的不良反應(yīng)，防止多藥耐藥的產(chǎn)生。多年來，國內(nèi)外相繼創(chuàng)建了一系列體內(nèi)、外預(yù)測腫瘤化療藥物敏感性的方法，體內(nèi)法目前常用的有裸鼠皮下移植藥敏測定法，移植瘤模型對抗癌藥的反應(yīng)與臨床有較好的相關(guān)性，對臨床療效有重要的參考價值。但其費(fèi)用昂貴，移植瘤生長慢，試驗(yàn)周期長，不適合臨床常規(guī)使用。體外法主要有人體腫瘤細(xì)胞集落測定(HTCA)，放射性標(biāo)記代謝物前體摻入法，快速熒光分析法，MTT比色法，細(xì)胞團(tuán)法，三磷酸腺苷法等。這些腫瘤藥敏試驗(yàn)體外法雖然快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高、且較經(jīng)濟(jì)，但需要從原發(fā)腫瘤體外分離并培養(yǎng)，脫離了原發(fā)腫瘤的生長環(huán)境，培養(yǎng)成功率低。因此，目前藥敏試驗(yàn)研究主要集中在試驗(yàn)室研究，真正進(jìn)入臨床前瞻性試驗(yàn)、指導(dǎo)臨床用藥的報(bào)道較少。

如今隨著藥物基因組學(xué)的發(fā)展，藥物活性及毒性相關(guān)基因研究的深入，藥物治療模式開始由過去的診斷導(dǎo)向治療向根據(jù)個體的遺傳結(jié)構(gòu)實(shí)行基因?qū)蛐灾委煹男履Ｊ睫D(zhuǎn)換，為從分子水平研制和開發(fā)藥物敏感試劑盒提供了新的理論依據(jù)。不同的個體，藥物代謝酶基因及藥物作用靶點(diǎn)基因表達(dá)是有差異的，這些基因的變化，如多態(tài)性、突變及過表達(dá)與腫瘤臨床治療的敏感性密切相關(guān)。因此，通過檢測這些藥物相關(guān)基因變化，來選擇合理的化療方案，將對腫瘤的個體化治療和預(yù)見性治療具有指導(dǎo)意義，可提高腫瘤臨床治療的效果。

作為廣譜抗腫瘤藥物，鉑類抗癌藥廣泛應(yīng)用于肺癌、卵巢癌、食管癌、頭頸部鱗癌、腸癌及膀胱癌等上皮來源的腫瘤。它主要作用于DNA，形成泡狀鏈內(nèi)鉑-DNA加合物，引起DNA復(fù)制障礙，抑制細(xì)胞分裂。鉑-DNA損傷的清除是通過核苷酸剪切修復(fù)(NER)完成的，在這一通路中，限速酶切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因(ERCC1)扮演了重要的角色。許多研究表明ERCC1基因過表達(dá)可能改變DNA修復(fù)能力，從而直接影響以鉑類為基礎(chǔ)聯(lián)合方案的療效。2006年9月新英格蘭雜志發(fā)表的文章表明ERCC1蛋白表達(dá)陰性的患者術(shù)后輔助鉑類聯(lián)合化療能明顯提高患者的生存(OR?0.65；95％CI：0.50-0.86；p＝0.002)，然而ERCC1陽性的患者對術(shù)后含鉑類方案卻不能獲益(OR?1.14；95％CI：0.84-1.55；p＝0.40)。除此之外，ERCC1?mRNA表達(dá)影響了腸癌，膀胱癌，非小細(xì)胞肺癌和卵巢癌的患者的治療療效和總體生存時間。

免疫組化是檢測組織標(biāo)本中ERCC1蛋白表達(dá)常用的方法，但大多數(shù)腫瘤患者是晚期，失去了手術(shù)機(jī)會，大快腫瘤組織難以獲得。而實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)以其特異性強(qiáng)、所需組織少(活檢組織，脫落細(xì)胞等)、定量、敏感、方便等優(yōu)點(diǎn)已得到全世界的公認(rèn)，廣泛用于腫瘤相關(guān)基因、病原體等諸多臨床檢測。用定量RT-PCR法檢測藥物敏感相關(guān)基因來預(yù)測藥物療效是必然趨勢，而成熟、標(biāo)準(zhǔn)的試劑盒是定量PCR成功檢測的關(guān)鍵。目前熒光實(shí)時定量PCR所使用的熒光化學(xué)方法主要有染料法(SYBR?Green?I染料)和探針法。其中SYBR?Green?I染料法不需要設(shè)計(jì)合成序列特異性探針，而且熔點(diǎn)曲線來分析產(chǎn)物的均一性有助于更準(zhǔn)確地分析和識別擴(kuò)增產(chǎn)物和引物二聚體，是一種簡便，性價比較高的實(shí)時監(jiān)測方法。

發(fā)明內(nèi)容

本實(shí)用新型的目的是為克服定量PCR探針法技術(shù)需要設(shè)計(jì)合成序列特異性探針，檢測成本高的不足之處，采用SYBR?Green?I染料定量PCR技術(shù)，提供一種鉑類抗癌藥敏感性相關(guān)基因檢測試劑盒。