[實用新型]四環素ELISA檢測試劑盒

在審

• 申請號: 200720127295.4
• 申請日: 2007-08-02
• 公開（公告）號: CN201130184Y
• 公開（公告）日: 2008-10-08
• 發明（設計）人: 沈建忠;何方洋;萬宇平;馮才偉;吳小平;馮月君;屈曉麗;陳煒玲;汪善良;劉平;孫倩
• 申請（專利權）人: 北京望爾生物技術有限公司;北京望爾康泰生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/78;G01N33/545;G01N33/549
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

(一)技術領域：

本實用新型涉及動物源性食品中藥物殘留量的檢測試劑盒，特別是檢測動物源性食品中四環素殘留量的試劑盒。

(二)背景技術：

在歐盟第675/92號令中(出合于1992年3月18日)已經初步規定在肌肉及牛奶中的四環素族化合物的總量不得超過100μg/L，在腎臟，肝臟及雞蛋中分別不得超過600μg/L，300μg/L及200μg/L。

目前，四環素族抗菌素殘留的檢測是用高效液相色譜來進行的，HPLC方法的缺點是制備樣品要耗費大量時間，并且需要昂貴的實驗室設備。

(三)實用新型內容：本實用新型所要解決的問題是提供一種小巧輕便的四環素殘留檢測試劑盒，其操作簡便，檢測快速、準確、靈敏度高，成本低，穩定性好，需要的技術含量不高，可進行一次連續多個樣品中四環素含量的測定，減少了檢驗樣本所需要的時間。

本實用新型的技術方案是：采用96孔聚苯乙烯試劑板作為固相載體，放入真空鋁鉑袋內，在試劑盒酶標板微孔條上預包被四環素偶聯抗原制成檢測板，以塑料硬膜為蓋板膜，將40ml濃縮洗滌液、50ml濃縮復溶液、12ml酶標二抗、7ml四環素抗體工作液、7ml顯色液A液、7ml顯色液B液、7ml終止液和6瓶1ml梯度濃度的標準品溶液和1瓶1ml高濃度標準品溶液，試劑用不同大小、不同顏色的塑料瓶和玻璃瓶盛裝并固定在泡沫塑料模具中與試劑板、蓋板膜一同封裝在盒內，以便于攜帶和運輸。每一個試劑盒中的試劑足夠進行96次測定(包括標準分析孔)，既可進行一次連續多個樣品的檢測，也可以將板孔拆開多次檢測。檢測時，樣本中的殘留物(四環素)將和酶標板微孔條上預包被的偶聯四環素抗原競爭抗四環素抗體，加入酶標二抗后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與樣本中所含殘留物(四環素)的含量成負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中四環素的殘留量，其操作簡便易行。

經實驗表明本試劑盒具有很高的靈敏度：組織樣品的最低檢測限為5μg/kg、蜂蜜的最低檢測限為4μg/kg；組織樣品的回收率為80％±15％、蜂蜜的回收率為80％±15％；同咪諾四環素的交叉反應率為125％、同吡咯烷甲四環素的交叉反應率為110％、同金霉素的交叉反應率為70％、同土霉素的交叉反應率為20％。相對于其他四環素殘留檢測方法，本試劑盒所需儀器較少，只需要酶標儀、勻質器、振蕩機和微量加樣器，同類實驗室一般均有配備，所需成本較低。

本實驗新型的有益效果是：能快速、簡便、靈敏、準確地用于動物源性食品中四環素殘留的檢測。

(四)附圖說明：

圖1為本實驗新型酶聯板的側面橫剖面圖(長為12.8cm)；

圖2為本實驗新型酶聯板的俯視圖；

圖3為本實驗新型酶聯板的側面縱剖面圖(長為8.55cm)；

圖4為本實驗新型蓋板膜平面圖；

圖5為本實驗新型試劑瓶縱剖面平面圖；

圖6為本實驗新型固定泡沫模具的俯視圖。

參見附圖：酶標反應微孔條(2)預包被四環素偶聯抗原(3)固定于酶標板的外框支撐架(1)上，酶標反應微孔條(2)可隨要求拆卸；蓋板膜(4)用于酶標板置水浴或恒溫箱內反應時封蓋酶標反應微孔條(2)；透明帽的半透明塑料試劑瓶(5)用于封裝40ml濃縮洗滌液；藍色帽的半透明塑料試劑瓶(5)用于封裝50ml濃縮復溶液；白色帽(6)的白色塑料試劑瓶(7)用于封裝7ml顯色液A液，紅色帽(6)的黑色塑料試劑瓶(7)用于封裝7ml顯色液B液，黃色帽(6)的白色塑料試劑瓶(7)用于封裝7ml終止液，綠色帽的白色塑料試劑瓶(8)用于封裝7ml四環素抗體工作液，紅色帽的白色塑料試劑瓶(8)用于封裝12ml酶標二抗，白色帽的棕色玻璃試劑瓶(9)用于封裝1ml/瓶的標準品溶液及1ml高濃度標準品溶液；泡沫塑料模具(10)有15個瓶位，放置位置依次為：40ml濃縮洗滌液瓶位(18)，50ml濃縮復溶液(11)，7ml顯色液A液瓶位(14)，7ml顯色液B液瓶位(13)，7ml終止液瓶位(12)、7ml四環素抗體工作液瓶位(16)，12ml酶標二抗瓶位(15)，6種1ml/瓶各種濃度的標準品溶液及1瓶1ml高濃度標準品溶液瓶位(17)。

本實驗新型的實施例：

一、樣本的前處理

1.配液：

配液1：復溶工作液

用去離子水將2×濃縮復溶液按1∶1體積比進行稀釋(1份2×濃縮復溶液+1份去離子水)用于樣本的復溶

配液2：0.02M磷酸鹽緩沖液