[發(fā)明專利]枸杞HPLC指紋圖譜的建立方法及其標(biāo)準指紋圖譜

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710306938.6
• 申請日: 2007-12-28
• 公開（公告）號: CN101216466A
• 公開（公告）日: 2008-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周考文;王樹聰;李鳳桐
• 申請（專利權(quán)）人: 北京聯(lián)合大學(xué)生物化學(xué)工程學(xué)院
• 主分類號: G01N30/86
• 分類號: G01N30/86;G01N30/06;G01N30/02;G01N33/15
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種中藥材指紋圖譜的建立方法，尤其是枸杞藥材高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜的建立方法，以及由此方法所得到的枸杞HPLC標(biāo)準指紋圖譜。屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

中藥指紋圖譜特指中藥樣本經(jīng)光譜或色譜等現(xiàn)代分析技術(shù)得到的中藥各組分群體特征的圖譜或圖象。目前指紋圖譜已成為國內(nèi)外公認的鑒別中藥品種和評價中藥質(zhì)量的最有效手段之一。美國食品藥品管理局在1996年制定的《FDA關(guān)于植物制品的指南》中，要求對植物原料、植物藥中間品和植物藥產(chǎn)品提供相應(yīng)的指紋圖譜。英國草藥典、印度草藥典以及加拿大藥用及芳香植物學(xué)會、德國藥用植物學(xué)會也接受色譜指紋圖譜。中國國家藥品監(jiān)督管理部門于2000年發(fā)布了《中藥注射劑的指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》，明確要求對新申報的中藥注射劑和已上市的中藥注射劑實行指紋圖譜標(biāo)準。

中藥指紋圖譜經(jīng)過了數(shù)十年的研究，使用了包括紫外、紅外、氣相、高效液相、薄層、核磁共振、掃描電子顯微鏡、計算機圖像分析、電泳技術(shù)、同功酶分析法、分子生物學(xué)技術(shù)、聚類分析技術(shù)等許多現(xiàn)代分析測試手段，為中藥的物質(zhì)鑒定和成分分析積累了大量的數(shù)據(jù)。但從中藥全面質(zhì)量控制的角度看，還遠未達到有效地反映和控制中藥的整體質(zhì)量的目的。高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜在國際上容易獲得認可，包括美國、英國、法國、加拿大、德國、日本和印度在內(nèi)的許多國家更愿意接受HPLC指紋圖譜。因此，為中藥材建立相應(yīng)的HPLC指紋圖譜，是現(xiàn)階段控制中藥內(nèi)在質(zhì)量的有效手段。

枸杞子為茄科植物枸杞之成熟果實，別名西枸杞、白刺、山枸杞、白疙針，簡稱枸杞，具有補腎益精，養(yǎng)肝明目，補血安神，生津止渴，潤肺止咳之功效，臨床主要用于治療肝腎陰虧、腰膝酸軟、頭暈?zāi)垦！⒛炕瓒鄿I和虛勞咳嗽等疾病。枸杞中含有豐富的枸杞多糖、脂肪、蛋白質(zhì)、游離氨基酸、牛磺酸、甜菜堿、維生素B1、B2、E、C，此外，還含有大量的礦物元素，如鉀、鈉、鈣、鎂、鐵、銅、錳、鋅、硒等。目前，人們對枸杞的質(zhì)量控制還只限于對其諸多組分中某個有效成分或指標(biāo)性成分進行定性、定量分析，缺乏全面反映枸杞質(zhì)量的標(biāo)準控制手段。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種枸杞HPLC指紋圖譜的建立方法，以及由此方法所得到的枸杞藥材標(biāo)準指紋圖譜。為實現(xiàn)此目的，本發(fā)明通過對枸杞高效液相色譜指紋圖譜的研究，提出了一種枸杞藥材質(zhì)量控制方法，彌補了現(xiàn)有質(zhì)量控制技術(shù)的不足，使枸杞藥材的質(zhì)量控制更加完善和科學(xué)。

本發(fā)明的枸杞HPLC指紋圖譜的建立方法，包括如下步驟：

(1)供試品溶液的制備：精密稱取藥材粉末10g，置于具塞容器中，加入60～80％的甲醇100～800mL，超聲震蕩60min，冷卻后定容，取上清液用0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。

(2)高效液相色譜分析：色譜分離柱填料為5μm?Kromasil-C18，250×4.6mm；流動相為水-乙腈；采用梯度洗脫方式：0min→15min→30min→45min→60min，乙腈10％→22％→35％→45％→55％；流速0.8～1.2mL/min；檢測波長254nm；柱溫25～45℃。在此條件下分析供試品溶液，得到枸杞藥材的指紋圖譜。

(3)標(biāo)準指紋圖譜的確定：按照本發(fā)明提供的方法，對21批枸杞藥材建立了HPLC指紋圖譜，通過分析比較，確定了13個共有特征峰，其保留時間分別為：2.4min、3.9min、5.4min、10.8min、14.0min、19.7min、24.1min、28.5min、29.2min、38.9min、43.3min、47.0min、59.8min，這些共有特征峰構(gòu)成了枸杞藥材的指紋特征，可作為枸杞藥材的標(biāo)準指紋圖譜。

本發(fā)明具有如下顯著的優(yōu)點和用途：

(1)將枸杞藥材作為一個整體對待，通過比較其共有峰可以找出不同藥材之間的細微差異；

(2)供試品制作簡便，色譜條件容易實現(xiàn)；

(3)方法的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性都比較好；

(4)適于對枸杞藥材真?zhèn)巍a(chǎn)地和品質(zhì)的鑒別和控制。

附圖說明

圖1是本發(fā)明提供的枸杞藥材的標(biāo)準指紋圖譜。從左到右分別標(biāo)出了其13個共有特征峰。

具體實施方式

本發(fā)明的優(yōu)選實施例如下：

(1)儀器和藥品：使用島津LC10A高效液相色譜儀；枸杞藥材共21批，均購于中草藥商店；其它試劑為色譜純或分析純。