[發(fā)明專利]家蠶滯育品種的低溫催青轉(zhuǎn)基因方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710303903.7
• 申請日: 2007-12-21
• 公開（公告）號: CN101195833A
• 公開（公告）日: 2008-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙愛春;徐漢福;夏慶友;魯成;向仲懷
• 申請（專利權(quán)）人: 西南大學(xué);重慶拓桑生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/89;A01K67/04
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 鄒曉軍

1.一種家蠶滯育品種的低溫催青轉(zhuǎn)基因方法，其特征在于依次通過下列步驟實現(xiàn)：

(1)將家蠶滯育品種的蠶卵通過人工孵化處理后，置于15℃恒溫、相對濕度75％的環(huán)境中催青至孵化，孵化的蟻蠶在常規(guī)條件下進行飼養(yǎng)；

(2)在25℃的種繭保護溫度下收集同時化蛾的雌雄蠶蛾，在25℃、弱光的條件下交配4h后拆對，并將雌蛾投放于上漿的蠶連紙上，在黑暗的環(huán)境中產(chǎn)卵，每間隔1h收集一次蠶卵，并將收集的蠶卵置于25℃的環(huán)境中保護；

(3)將蠶卵連同蠶連紙片用自來水沖洗以后，于蒸餾水中浸泡2-3min，而后用鑷子將蠶卵轉(zhuǎn)移至用75％酒精消毒的載玻片上，并按照蠶卵腹面向右的標(biāo)準(zhǔn)將其排列整齊，排列好的蠶卵置于35-37％的甲醛蒸氣中消毒5min；

(5)以收集時間開始記時，于收集后3h-6h用顯微注射儀將10-15nl、總濃度400ng/ul的轉(zhuǎn)座載體質(zhì)粒從蠶卵腹面中央注入已經(jīng)消毒的蠶卵中，并用無毒的膠水封閉卵殼注射留下的小孔；

(6)將注射完成的蠶卵在35-37％的甲醛蒸氣中消毒5min后，置于25℃、相對濕度85％以上的濕度條件下，進行催青直到孵化，飼養(yǎng)孵化出來的蟻蠶，將當(dāng)代(G0)的蠶蛾進行自交或回交，獲得G1代蠶卵，掃描G1代蠶卵獲得轉(zhuǎn)基因個體；最后，獲得的轉(zhuǎn)基因個體正常飼養(yǎng)、傳代，即完成家蠶滯育品種的轉(zhuǎn)基因蠶的制作。

h表示小時，min表示分鐘。