[發(fā)明專利]一種與水稻抗條紋葉枯病基因連鎖的分子標(biāo)記

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710190927.6
• 申請日: 2007-12-03
• 公開（公告）號: CN101240336A
• 公開（公告）日: 2008-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周彤;王磊;周益軍;熊如意;程兆榜
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種與水稻條紋葉枯病抗病基因相連鎖的分子標(biāo)記，可應(yīng)用于分子標(biāo)記輔助育種，屬于水稻抗病育種和分子生物學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

水稻條紋病毒(RSV)引起的水稻條紋葉枯病最早于1897年在日本關(guān)東發(fā)現(xiàn)，后在朝鮮、烏克蘭和中國均有發(fā)生。我國自1962年在江浙發(fā)現(xiàn)該病毒以來，已經(jīng)在全國16個省、市、自治區(qū)發(fā)生，目前以江蘇省為主的長江下游稻區(qū)仍處于流行期。據(jù)不完全統(tǒng)計，僅2004年江蘇省水稻條紋葉枯病發(fā)生面積就達2700萬畝，占江蘇省水稻面積的79％，專家預(yù)計2006后的五年內(nèi)水稻條紋葉枯病仍將呈偏重發(fā)生趨勢，預(yù)防工作刻不容緩。

國外的防治經(jīng)驗表明，針對這一病害最經(jīng)濟而有效的方法是選用抗病品種。然而目前病區(qū)生產(chǎn)上使用的水稻品種大多以感病材料為主，品種抗性改良和大面積的品種更替勢在必行。前人的研究水稻條紋葉枯病抗性有單基因和兩對基因控制等遺傳模式，而其中以來源于秈稻品種Modan的位于第十一染色體的Stv-bⁱ單基因控制的抗性表現(xiàn)最強，以該位點為抗病基因?qū)肽繕?biāo)是當(dāng)前首選的品種選育策略。目前水稻條紋葉枯病的研究者多借鑒日本60年代建立的室內(nèi)鑒定方法，但該方法技術(shù)門檻高、費時費力的特點使其不適于抗病育種中大量材料的抗性初篩。另一方面水稻條紋葉枯病田間抗性鑒定往往表現(xiàn)出較差的穩(wěn)定性和重復(fù)性。抗性鑒定方法的技術(shù)瓶頸也是導(dǎo)致水稻條紋葉枯病的抗病育種進展緩慢的重要原因。而近年來隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展為復(fù)雜的抗病品種選育提供了新的思路，如鄧其明等通過常規(guī)回交育種結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)將來自IRBB24的Xa21和Xa4兩個抗白葉枯病基用聚合到感病的雜交稻恢復(fù)系綿恢725中，分子標(biāo)記技術(shù)已成為輔助育種的重要手段。

武育粳3號是水稻條紋葉枯病病區(qū)推廣面積最大的感病品種，其因為高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的栽培特性和口感優(yōu)良的特點深受生產(chǎn)者和消費者的喜愛，是用于品種改良的最佳候選品種之一，而鎮(zhèn)稻88是目前生產(chǎn)上使用的對條紋葉枯病抗性表現(xiàn)最為穩(wěn)定的抗病品種，同時也是江蘇省水稻品種區(qū)試中條紋葉枯病抗性鑒定試驗的預(yù)設(shè)抗病對照，是理想的抗源材料，其中含有Stv-bⁱ(《江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)》2005，(5)：22-23)，以這兩個品種及其衍生品種為親本進行抗病品種的選育不僅可以克服秈粳亞種間雜交不育的缺點，而且由于其本身為主栽品種的特性可以加快選育進程，因此以這兩個品種為材料篩選的抗性基因連鎖標(biāo)記，可望直接應(yīng)用于抗病品種的選育，以提高選擇效率和加快育種進程。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對上述研究背景，以武育粳3號/鎮(zhèn)稻88的F₂群體為作圖群體，通過抗病性鑒定結(jié)果和SSR標(biāo)記數(shù)據(jù)間的連鎖分析，獲得了與水稻條紋葉枯病抗性基因連鎖的SSR標(biāo)記RM229，該標(biāo)記可應(yīng)用于水稻條紋葉枯病抗病品種的輔助選擇育種。

本發(fā)明所提供的與水稻條紋葉枯病抗性基因連鎖的SSR標(biāo)記RM229，是通過以下方法獲得的：

1)以感病品種武育粳3號為母本，抗病品種鎮(zhèn)稻88為父本，構(gòu)建F₂定位群體，分單株收獲F_2:3家系的種子用于抗性鑒定；

2)以SDS方法提取親本、F₁及F₂代的DNA；

3)根據(jù)http://www.gramene.org相關(guān)信息合成SSR引物，PCR后采用8％的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，獲得分子標(biāo)記數(shù)據(jù)；

4)以攜帶水稻條紋病毒的灰飛虱為接種體，采用單分蘗接種鑒定方法，測定F₂植株抗病性，以發(fā)病與否區(qū)分為抗病和感病；

5)以攜帶水稻條紋病毒的灰飛虱為接種體，采用苗期接種鑒定方法，測定F_2:3株系抗病性，按發(fā)病率劃分抗性水平，0-10％為抗病，10.1-30％為中抗，30.1％以上為感病；

6)結(jié)合4)和5)結(jié)果，確定F₂植株抗病性；

7)根據(jù)連鎖遺傳定律，按照MapmakerEXP3.0b軟件的要求，將與父本鎮(zhèn)稻88相同的帶型賦值為“A”，與母本武育粳3號相同的帶型賦值為“B”，與F₁代相同的帶型賦值為“H”，帶型不清楚或缺失的賦值為“一”，用Kosambi函數(shù)算出遺傳距離。

與水稻條紋葉枯病抗病基因連鎖的SSR標(biāo)記RM229的應(yīng)用包括：在以鎮(zhèn)稻88及其衍生品種(系)與武育粳3號及其衍生品種(系)為親本的雜交組合的后代單個水稻植株為對象，通過檢測其RM229標(biāo)記的帶型數(shù)據(jù)，可以預(yù)測該植株對水稻條紋葉枯病的抗性。