[發(fā)明專利]常壓加長兩段層析柱系統(tǒng)及其在葛根素糖基化衍生物分離制備中的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710190886.0
• 申請日: 2007-11-30
• 公開（公告）號: CN101161325A
• 公開（公告）日: 2008-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 袁生;朱守創(chuàng);丁娟芳;叢曉東;戴亦軍
• 申請（專利權(quán)）人: 南京師范大學
• 主分類號: B01D15/34
• 分類號: B01D15/34;C07H1/06;C07H17/07
• 代理公司: 南京知識律師事務所
• 代理人: 盧亞麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種層析柱系統(tǒng)，具體是常壓加長兩段層析柱系統(tǒng)及其在葛根素糖基化衍生物分離制備中的應用。

背景技術(shù)

葛根素(puerarin)，4′，7-二羥基-8-β-D-葡萄糖基異黃酮(8-C-β-D-Glucopyranosyl-7，4′-hydroxy-Isoflavone)(結(jié)構(gòu)如式A)，臨床上被廣泛應用于心腦血管系統(tǒng)疾病(如心絞痛、心肌梗死、心律失常、冠心病、心力衰竭、椎-基底動脈供血不足、高黏血癥、高血壓、腦血栓、腦水腫等)、糖尿病、眼底疾病(如視網(wǎng)膜動脈栓塞、單純性青光眼)、突發(fā)性耳聾、急性酒精中毒、擬菊酯類農(nóng)藥中毒及腫瘤的治療。但存在如下缺點：1)體內(nèi)消除速率快，臨床使用劑量較大，口服生物利用度低；2)水溶解度低，注射制劑大多含有助溶劑以增加制劑的穩(wěn)定性，但助溶劑的使用易產(chǎn)生一定的毒副作用，致使用藥安全性降低。為了改善葛根素的水溶性，進而改善其藥理活性、提高其生物利用度，我們利用氧化微桿菌(Microbacteriumoxydans)CGMCC?1788所含糖基化酶對葛根素進行糖基化修飾，獲得了葛根素-7-O-葡萄糖苷(結(jié)構(gòu)如式B)。

葛根素-7-O-葡萄糖苷水溶性明顯提高，在體內(nèi)存留時間延長，血管舒張活性有所改善，有望開發(fā)成為新的葛根素藥物。但葛根素經(jīng)氧化微桿菌靜息細胞轉(zhuǎn)化后得到的轉(zhuǎn)化液成分復雜，其中含有糖基化葛根素，葛根素，磷酸鹽，蔗糖，菌體代謝產(chǎn)物等。特別是葛根素與糖基化葛根素結(jié)構(gòu)相似，分離比較困難。采用現(xiàn)有的葛根素純化常用的大孔吸附樹脂普通層析柱層析法并不能有效地將轉(zhuǎn)化產(chǎn)物與葛根素相分離。

發(fā)明內(nèi)容

為了有效提高層析柱的分離因素和塔板數(shù)，本發(fā)明提供了一種常壓加長兩段層析柱系統(tǒng)，以有效增加層析柱的理論塔板數(shù)，結(jié)果顯示大大提高了層析的分離效率，從而達到了從葛根素轉(zhuǎn)化液中分離制備糖基化葛根素的目的。

本發(fā)明所述的常壓加長兩段層析柱系統(tǒng)，其特征在于，在普通層析柱的后面，有一個可拆卸的外接加長層析柱，所說的外接加長層析柱，由柔性管材制成。在使用時，采用普通濕法裝柱法向普通層析柱和外接加長層析柱中分別裝填預處理好的樹脂。填充外接加長層析柱時，先將該柱從高處垂下使該柱伸展，分批裝填樹脂直到填滿自然沉降壓實，然后將外接加長層析柱盤旋起來備用。層析時，用平衡溶液將層析柱系統(tǒng)充分平衡后，將外接加長層析柱與普通層析柱分離，將含待分離物質(zhì)的混合物溶液先流過普通層析柱進行吸附，然后用平衡溶液洗滌普通層析柱去除未吸附物質(zhì)，將外接加長層析柱接到普通層析柱出口處，用洗脫液開始洗脫，分部收集洗脫液并檢測，將相同洗脫峰的收集液合并。利用該法采用大孔吸附樹脂分離葛根素糖基化衍生物混合液，用低濃度的乙醇梯度洗脫，可有效地將葛根素與糖基葛根素相互分離，分離產(chǎn)物純度達到90％以上，產(chǎn)品回收率達到80％以上。

上述常壓加長兩段層析柱系統(tǒng)中，所說的外接加長層析柱是由一根柔性管材制成，其材質(zhì)可以是聚乙烯，聚氯乙烯，聚丙烯等各種塑料管，也可以是乳膠管，硅膠管，橡膠管等，但必須要有足夠的柔軟性，能夠隨意盤繞卷曲；其長度至少要達到與外接加長柱相連的普通層析柱的2倍以上，實際長度依據(jù)分離物質(zhì)需要確定；其直徑可與相連的普通層析柱相同，也可比相連的普通層析柱略粗或略細。

上述的常壓加長兩段柱層析系統(tǒng)在裝填樹脂時，需要將普通層析柱和外接加長層析柱分開，采用普通濕法裝柱法分別向普通層析柱和外接加長層析柱填入預處理好的樹脂；填充外接加長層析柱時，先將該柱從高處垂下使柱充分伸展，分批裝填樹脂直到填滿自然沉降壓實，然后將外接加長層析柱盤旋起來備用。

上述的常壓加長兩段柱層析系統(tǒng)所裝填的樹脂可以是極性或非極性吸附劑，如硅膠，氧化鋁，大孔樹脂，活性炭，硅藻土；可以是疏水性吸附劑，如Phenyl-Sepharose；可以是離子交換樹脂，如amberlite系列離子交換樹脂、dowex系列離子交換樹脂、duolite系列離子交換樹脂，asmit系列離子交換樹脂、diaion系列離子交換樹脂、ionac系列離子交換樹脂、allassion系列離子交換樹脂。

上述的常壓加長兩段柱層析系統(tǒng)在層析時，需要將外接加長層析柱與普通層析柱分離，將含待分離物質(zhì)的混合物溶液先流過普通層析柱進行吸附，接著用平衡溶液洗滌普通層析柱去除未吸附物質(zhì)后，再將外接加長層析柱接到普通層析柱出口處，進行洗脫分部收集。