[發明專利]用于洗滌柱的方法和用于提取膜結合靶分子的方法

無效

• 申請號: 200710187730.7
• 申請日: 2007-11-23
• 公開（公告）號: CN101440363A
• 公開（公告）日: 2009-05-27
• 發明（設計）人: 戴子煌
• 申請（專利權）人: 諾貝爾生物有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12M1/00
• 代理公司: 北京律盟知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 劉國偉

技術領域

本發明涉及一種用于洗滌柱的方法和一種提取諸如二氧化硅膜結合核酸(DNA或 RNA)的膜結合靶分子的方法。

背景技術

多種商品采用基于二氧化硅離液技術的膜柱(或一般稱作旋轉柱)以分離和純化核 酸(DNA/RNA)。在柱的底部安置有一張或若干張膜，并且柱內的空間可盛滿液體。當 將液體裝載在膜柱上時，施加適當力以使液體流過底部膜，并且隨后丟棄或收集流出的 液體。一般地，當在離心機上操作方法時，用來使液體流過膜的所謂的適當力可為離心 力，或當采用真空岐管時可為大氣壓力。

一般地，使用二氧化硅膜離液技術的純化程序包含3個步驟，即，結合、洗滌和洗 脫。這些商品的手冊通常為操作者的選擇提供兩種程序。一種程序是離心機方案，且另 一種程序是真空方案。與真空方案相比較，離心機方案包含更多步驟且花費更長時間， 并因此其適于處理較少數量的樣品。然而，因為柱中的液體在各離心程序后更完全地通 過膜并且液體的殘余物幾乎不留在柱中，所以離心機方案更穩定。另一方面，與離心機 方案相比較，真空方案更容易實行且花費較少時間，并因此其適于處理較大數量的樣品。 然而，因為通常柱中的液體在各真空程序后不可能完全通過膜并且看似有更多的液體留 在柱中，所以真空方案不穩定。特別地，在洗滌步驟的末尾，殘余洗滌液體可以污染下 一洗脫步驟并且導致洗脫出的核酸溶液含有殘余洗滌液體是極其可能的。從而，所述污 染物可能影響核酸的隨后應用。因此，優選在洗滌步驟后應用另外的離心步驟以消除殘 余洗滌液體。然而，因為真空方案能容易地在自動工作臺上進行操作，所以另外的離心 步驟將導致整個程序甚至更加難以使用。

此外，用于二氧化硅離液技術中的洗滌液體通常含有諸如醇的有機溶劑。使用洗滌 液體的主要目的是在沒有影響核酸與膜的結合狀態的情況下去除不希望有的雜質，而通 常為水或低鹽溶液的洗脫液體的主要目的是將在膜上結合的核酸洗脫出以便能將其收集 并且用于隨后應用。核酸的一些應用對少量有機溶劑敏感。例如，如果用于聚合酶鏈反 應(PCR)中的試劑含有痕量醇，那么醇將對PCR有明顯抑制作用。或者，為消除膜柱 中的殘余有機洗滌液體，也能加熱膜柱而不是進行離心。但是必須將加熱條件調整到最 佳狀態。如果過度加熱二氧化硅膜，那么其可能變得太干，導致結合核酸不能溶解在洗 脫液體中。因此，可能從而使核酸的產量降低。如果不充分加熱膜，那么不能消除有機 溶劑的殘余物。

因此，為真空方案的應用并且尤其為自動化設計一種用于洗滌柱的方法和一種用于 提取諸如二氧化硅膜結合核酸(DNA或RNA)的膜結合靶分子的方法以在不一定需要另 外離心步驟或加熱步驟的同時消除有機洗滌液體的殘余物是有價值的。

發明內容

為真空方案的應用并且尤其為自動化提供一種用于洗滌柱的方法以消除有機洗滌液 體的殘余物和/或雜質為本發明的一個目的。

提供一種含有上述洗滌方法的用于提取膜結合靶分子的方法也為本發明的另一個目 標。

根據本發明，洗滌柱的方法的特征為二氧化硅膜柱含有諸如核酸(DNA或RNA)的 膜結合靶分子和雜質，并且隨后將柱盛滿洗滌液體，諸如，具有將膜結合靶分子從膜釋 放為液體游離形式的能力的洗脫液體或水，并且最后將不通過膜的留在柱中的洗滌液體 隨后從柱去除以便留下用于下一洗脫步驟的干凈膜柱。

根據本發明的另一方面，一種含有上述洗滌方法的用于提取膜結合靶分子的方法包 含以下步驟：

a)制備在底端含有至少一張膜的柱；

b)將所述柱盛滿含有膜結合靶分子和雜質的溶液；

c)使所述溶液流過所述膜以致于將所述膜結合靶分子結合到膜上并且將溶液排出 柱；

d)將柱盛滿第一種洗滌液體以去除雜質而仍留下在膜上結合的膜結合靶分子；

e)使所述第一種洗滌液體流過膜并且流出柱；

f)將柱盛滿第二種具有將膜結合靶分子從膜釋放為液體游離形式的能力的洗滌液 體；

g)將所述第二種洗滌液體從柱的頂部去除；

h)將柱盛滿洗脫液體以便從膜將膜結合靶分子釋放為液體游離形式；和

i)使洗脫液體流過膜，并且收集洗脫液體以回收膜結合靶分子。

從本發明的優選實施例的以下詳細描述和附圖將得到本發明的其他目標、優勢和新 穎特征。

附圖說明