[發明專利]人表皮生長因子受體-血小板因子-4融合蛋白及用途

無效

• 申請號: 200710173459.1
• 申請日: 2007-12-27
• 公開（公告）號: CN101469026A
• 公開（公告）日: 2009-07-01
• 發明（設計）人: 李峰
• 申請（專利權）人: 上海匯康生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K38/18;A61P35/00
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技術領域

本發明涉及DNA重組技術和藥物領域。具體的說，本發明涉及一種具有人表皮生長因子受體(hEGFR)特異性的融合蛋白，及以該蛋白為活性成分的藥物及在制藥行業中的應用。

背景技術

人表皮生長因子(hEGF)是正常人體內的一種細胞因子，系一單鏈多肽，由53個氨基酸組成。hEGF是一種作用較廣的促有絲分裂原，具有多種生物學功能。在人乳腺癌、肺癌等實體腫瘤細胞的表面，存在著異常大量的表皮生長因子受體。依據這已特性，可以利用EGFR的配體或抗體與毒素蛋白融合，研制導向毒素式的抗腫瘤藥物。

血小板因子—4是人體內正常存在的蛋白，是一種血管生成抑制因子。

發明內容

本發明目的是提供一種人表皮生長因子受體特異性的融合蛋白，該蛋白可以特異性的進入靶細胞，并將靶細胞殺死。

本發明的融合蛋白由人表皮生長因子與血小板因子—4融合而成，該融合蛋白的編碼基因具有人表皮細胞因子的核苷酸序列及血小板因子—4的核苷酸序列。

本發明的另一目的是提供一種新的以本發明的融合蛋白為活性成分的抗腫瘤的藥物，特別是乳腺癌、肺癌及肝癌。

本發明的又一目的是提供本發明的融合蛋白在制備抗腫瘤藥物方面的用途。以本發明的融合蛋白作為活性成分，該藥物用于治療腫瘤。在需要的時候，在上述藥物中還可以含有一種或多種藥物可接受的載體。所述載體包括藥學領域常規的稀釋劑、填充劑、濕潤劑等。

具體實施方式

1、構建融合蛋白

根據hEGF和血小板因子—4基因的序列，分別設計引物，以RT-PCR法擴增出兩者的cDNA，酶切后連接入pET22b，經過酶切鑒定及測序分析為正確序列。

2、融合蛋白表達

所構建的融合蛋白基因轉化大腸桿菌，經過IPTG誘導，SDS-PAGE分析，上述融合蛋白在大腸桿菌中高效表達。

3、融合蛋白的變性、復性及純化

融合蛋白在大腸桿菌中以包涵體形式表達，經過超聲破碎，包涵體變性，在復性液中復性，利用層析法獲得純度95％以上的融合蛋白。對該蛋白測序表明，所得到的蛋白確實為所發明的目的蛋白。

4、觀察融合蛋白對不同腫瘤細胞的生長的抑制作用。

以該融合蛋白分別對幾株不同的腫瘤細胞株作了量效關系實驗，比較融合蛋白對不同腫瘤細胞株體外細胞毒作用。