[發明專利]人肺腺癌干細胞的分離鑒定方法

無效

• 申請號: 200710172786.5
• 申請日: 2007-12-21
• 公開（公告）號: CN101463342A
• 公開（公告）日: 2009-06-24
• 發明（設計）人: 董強剛
• 申請（專利權）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08;C07K14/705;C07K14/71;C07K16/28;C12Q1/68;G01N33/574
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 范 征

技術領域

本發明屬于細胞生物學領域，更具體地，本發明涉及肺腺癌干細胞(群)的分離鑒定方法。

背景技術

肺腺癌是肺癌最常見組織類型之一，其發病率約占肺癌總數的30～40％。肺腺癌在外周氣道、尤其是細支氣管和肺泡多發，其癌前期病變稱為不典型性腺瘤樣增生(Atypic?adenomatous?hyperplasia，AAH)，表現為異常增生細胞沿肺泡壁排列，形態類似非纖毛柱狀(Clara)細胞或II型肺泡(AT2)細胞。但此類早期腺癌的細胞起源尚不清楚。

美國研究者Kim等通過實驗研究，首次揭示肺腺癌是一種干細胞疾病，其起源細胞(Originating?cells)是位于小鼠肺臟氣道末段細支氣管-肺泡導管連接處(BADJ)的細支氣管肺泡干細胞(Branchioaveolar?Stem?Cells，BASC)。BASC經惡性轉化后成為肺腺癌干細胞，其特征是同時表達細支氣管非纖毛柱狀上皮(Clara細胞)標志(即Clara細胞分泌蛋白，CCSP)和II型肺泡細胞標志(即C型肺泡活性蛋白，SP-C)。而加拿大研究者Ho等則報道，人體肺癌(包括肺腺癌)干細胞主要富集在側群(Side?population，SP)細胞組分中。最近，意大利研究者Eramo等發現人體肺癌(包括肺腺癌)干細胞屬于CD133陽性細胞。

鑒于目前關于肺腺癌干細胞(Lung?Adenocarcinoma?Stem?Cells，LASC)的特性和起源不盡清楚，各家說法不同，因而分離與鑒定肺腺癌干細胞仍然是本領域迫切需要研究的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供肺腺癌干細胞(群)的分離鑒定方法。

本發明的另一目的在于提供可用于分離鑒定肺腺癌干細胞(群)的試劑或試劑盒。

在本發明的第一方面，提供一種從肺腺癌細胞群中分離肺腺癌干細胞(群)的方法，所述方法包括：從肺腺癌細胞群中分離出表達CD24和IGF-1R(胰島素樣生長因子-1受體)的細胞(群)，該細胞(群)是肺腺癌干細胞(群)。

在另一優選例中，所述的CD24和IGF-1R表達在細胞的表面。

在另一優選例中，所述的肺腺癌干細胞是人肺腺癌干細胞。

在另一優選例中，所述的肺腺癌干細胞表達胚胎干細胞標志OCT4和Bmi-1；且表達肺干細胞標志CCSP(Clara細胞分泌蛋白)，SP-C(C型肺泡活性蛋白)，TTF-1(甲狀腺轉錄因子)和Gremlin。

在另一優選例中，所述的從肺腺癌細胞群中分離出表達CD24和IGF-1R的細胞(群)的方法是：

(1)先利用CD24的特異性抗體從肺腺癌細胞群中分離出表達CD24的細胞(群)，然后利用IGF-1R的特異性抗體從所獲得的表達CD24的細胞(群)中分離出同時還表達IGF-1R的細胞(群)；或者

(2)先利用IGF-1R的特異性抗體分離出表達IGF-1R的細胞(群)；然后利用CD24的特異性抗體從所獲得的表達IGF-1R的細胞(群)中分離出同時還表達CD24的細胞(群)。

在另一優選例中，所述的從肺腺癌細胞群中分離出表達CD24和IGF-1R的細胞(群)的方法是：

(a)將肺腺癌細胞群與表面攜帶第一抗體的固相載體孵育，從而形成“肺腺癌細胞-第一抗體-固相載體”復合物，分離出該復合物；其中所述的第一抗體選自：抗CD24的抗體，或抗IGF-1R的抗體；

(b)從步驟(a)獲得的復合物上去除“第一抗體-固相載體”，從而獲得經處理的肺腺癌細胞群；

(c)將步驟(b)獲得的肺腺癌細胞群與表面攜帶第二抗體的固相載體孵育，從而形成“肺腺癌細胞-第二抗體-固相載體”復合物，分離出該復合物；其中所述的第二抗體選自：抗CD24的抗體，或抗IGF-1R的抗體，且所述的第二抗體與第一抗體不同；

(d)從步驟(iii)獲得的復合物上去除“第二抗體-固相載體”，從而獲得表達CD24和IGF-1R的細胞(群)。

或者，所述的從肺腺癌細胞群中分離出表達CD24和IGF-1R的細胞(群)的方法是：

(i)將第一抗體加入肺腺癌細胞群，孵育后加入表面攜帶抗第一抗體的抗體的固相載體，從而形成“肺腺癌細胞-第一抗體-抗第一抗體的抗體-固相載體”復合物，分離出該復合物；其中所述的第一抗體選自：抗CD24的抗體，或抗IGF-1R的抗體；

(ii)從步驟(i)獲得的復合物上去除“第一抗體-抗第一抗體的抗體-固相載體”，從而獲得經處理的肺腺癌細胞群；