[發明專利]一種從積雪草總皂苷出發同時制備積雪草苷A與積雪草苷B的方法

無效

• 申請號: 200710164474.X
• 申請日: 2007-12-05
• 公開（公告）號: CN101182346A
• 公開（公告）日: 2008-05-21
• 發明（設計）人: 呂秀陽;鄭興芳;賈廣韜
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 張法高

技術領域

本發明涉及一種從積雪草總皂苷出發同時制備積雪草苷A與積雪草苷B的方法。

背景技術

積雪草【Centella?asiatica(L.)UrBan】為傘形科植物，植物學家林奈(Linnaeus，Carolus)于1764年將積雪草歸入天胡荽屬(Hydrocotyle)，并定名為Hydrocotyleasiatica?L.。在1879年，德國人UrBan根據花瓣的排列以及果實的棱數將其從天胡荽屬中的獨立出來并建立積雪草屬(Centella)，積雪草歸入該屬并更名為Centella?asiatica(L.)Urb.。積雪草主要分布于南北半球熱帶和亞熱帶地區，主產地為南非、印度、斯里蘭卡、馬來西亞、印度尼西亞、澳大利亞、日本等，我國亦產積雪草。積雪草在中國的藥用歷史已達二千多年之久，民間常用于治療感冒、扁桃腺炎、傳染性肝炎、痢疾、跌打損傷、疔瘡腫毒、外傷出血等。積雪草現代藥理學研究和應用有了很大發展，表明積雪草可用于治療抑郁癥、皮膚創傷、胃潰瘍、傳染性肝炎、皮膚病和流行性腦脊髓膜炎等。

積雪草的化學成分復雜，主要有三萜類、黃酮類、揮發油類、多炔烯類等。其中三萜類化合物是主要的藥效成分，包括積雪草苷、積雪草苷A、波熱模苷、波熱米苷、參枯尼苷、異參枯尼苷、積雪草酸、羥基積雪草波熱米酸、馬達積雪草酸等。積雪草總皂苷是從積雪草中提取得到的皂苷類物質的總稱，主要由三萜苷類物質組成，其中代表性成分主要有積雪草苷(Aisaticoside，CAS?No.：16830-15-2)、積雪草苷A(Asaiticoside?A；Madecassoside，CAS?No.：34540-22-2)和積雪草苷B(Asaiticoside?B，CAS?No.：125265-68-1)。積雪草苷A也叫羥基積雪草苷，積雪草苷B和積雪草苷A是一對同分異構體。積雪草苷A和積雪草苷B與積雪草苷相比多了一個羥基，極性差異較大，較易實現分離，但積雪草苷A和積雪草苷B的差異只在于其中一個甲基歸屬不同，且兩個不同的歸屬處于鄰位關系，這種差異在R基(Glu-Glu-Rha糖鍵)影響下顯得更加微小，因此積雪草苷A和積雪草苷B的分離非常困難，目前尚無有效的方法報道。

積雪草苷(a)、積雪草苷A(b)與積雪草苷B(c)的結構式分別如下：

研究表明，積雪草苷A與積雪草苷B的混合物具有促進傷口愈合、抗皺、抗炎、抗抑郁、促進智力等藥理作用。比較積雪草苷促進傷口愈合，治療疤痕的藥理作用可以發現，積雪草總皂苷的抗炎、抗抑郁、促進智力等藥理作用可能是積雪草苷A與積雪草苷B起了主要作用。同時還有研究表明，不同濃度以及不同質量組成的積雪草苷A與積雪草苷B混合物的抗炎藥理具有明顯的差異，所以非常有必要分離得到積雪草苷A與積雪草苷B純品，以進一步研究積雪草苷A與積雪草苷B的藥理作用，為新藥的開發提供基礎。

發明內容

本發明的目的是提供一種從積雪草總皂苷出發同時制備積雪草苷A與積雪草苷B的方法。

方法的步驟如下：

1)積雪草總皂苷用甲醇溶解后加入硅膠混合攪拌均勻，蒸干后得拌樣硅膠，積雪草總皂苷與硅膠的質量比例為0.05～0.2∶1；

2)層析柱中依序加入硅膠和拌樣硅膠，采用干法裝柱，干法層析柱的高徑比為3～9，硅膠與拌樣硅膠的高度比為3～8；

3)以有機溶劑I-有機溶劑II-水三元混合溶劑為流動相，以0.5～3床層體積/h的流速洗脫；

4)洗脫液經TLC分析后合并成三個餾分，餾分1為積雪草苷溶液，餾分2為積雪草苷、積雪草苷A、積雪草苷B的混合溶液，餾分3為積雪草苷A與積雪草苷B的混合溶液；

5)將餾分3真空濃縮、真空干燥后用乙腈-水混合溶劑溶解、過濾后得濾液；

6)C18硅膠采用濕法裝柱，柱子的高徑比為4～12，用乙腈-水混合溶劑相沖洗柱子；

7)濾液按0.01～0.1g積雪草苷A與積雪草苷B的混合物/1g?C18硅膠的比例上樣，乙腈-水混合溶劑以0.5～3床層體積/h的流速洗脫；

8)洗脫液經HPLC分析后合并成三個餾分，餾分4為積雪草苷B溶液，餾分5為積雪草苷B與積雪草苷A的混合溶液，餾分6為積雪草苷A溶液，餾分4與餾分6經真空濃縮、結晶、真空干燥后分別得積雪草苷B與積雪草苷A產品；

9)C18柱經乙腈-水混合溶劑沖洗再生后可再次上樣。

所述步驟1)中以0.08～0.15g積雪草總皂苷/1g硅膠的比例加入硅膠攪拌均勻。

步驟3)中有機溶劑I為氯仿或二氯甲烷或乙酸乙酯。

步驟3)中有機溶劑II為甲醇或乙醇。