[發明專利]一種提取蘿卜硫素的方法

無效

• 申請號: 200710156140.8
• 申請日: 2007-10-19
• 公開（公告）號: CN101143842A
• 公開（公告）日: 2008-03-19
• 發明（設計）人: 王向陽;沈蓮清;蘇光耀
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: C07C331/20
• 分類號: C07C331/20;A61K36/31
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司
• 代理人: 馮子玲

技術領域

本發明屬于生物化學技術領域，涉及天然產物中有效成分的提取方法，具體為從植物種子中提取蘿卜硫素的方法，尤其是從十字花科蔬菜中如西蘭花、蘿卜、甘藍和芥菜的種子中提取蘿卜硫素的方法。

背景技術

據世界衛生組織統計，目前全球每年因癌癥死亡的人數約為700萬，我國也有100萬人因此失去生命。今后20年全球癌癥新患者將由目前每年1000萬增加到5000萬，因癌癥死亡人數將由每年600萬增至1000萬。這是一組很沉重的數據，但直到現在，我們還是沒找到攻克癌癥的辦法。因此，研究和控制腫瘤是當今生命科學領域的重大的課題。流行病學及藥理學研究表明，癌癥發病率低的地方，人們飲食中蔬菜、水果所占比例較大，究其原因，是蔬菜、水果中存在一種或多種阻止或減慢癌癥發展的植物活性成分，如番茄中的番茄紅素、大豆制品中的大豆異黃酮、漿果中的鞣化酸以及十字花科蔬菜中的蘿卜硫素、吲哚類物質。它們均被證實具有良好的防癌抗癌作用。在眾多含有抗癌活性成分的蔬菜中，十字花科(洋白菜、花莖甘藍、球莖甘藍青花椰菜、芥蘭、萵苣、白蘿卜和高麗菜等)富含硫代葡萄糖苷(硫甙)，其在蔬菜本身具有的黑芥子酶作用下能降解成異硫代氰酸鹽類抗癌物質。蘿卜硫素是屬于異硫代氰酸鹽中的一種，其也是迄今為止蔬菜中發現的最強的抗癌成分。西蘭花種子富含蘿卜硫素前體的硫代葡萄糖苷。

硫代葡萄糖苷向異硫代氰酸鹽的轉化雖然有一定研究，但是缺少酶解條件、工藝調控條件、提取提純方法研究。目前缺少大規模提取蘿卜硫素的方法，更缺少把蘿卜硫素從其它異硫代氰酸鹽分離出來的技術。

近幾年來，我國學者也開展了一些關于異硫代氰酸鹽及其前體硫甙的研究，目前研究較多的是辣根與芥末中的異硫代氰酸鹽，其主要是作為調味品。不同異硫代氰酸鹽，其生物活性存在著很大的區別。對于蘿卜硫素的提取、生物活性缺少研究。國外對蘿卜硫素的研究目前停留在實驗室階段，缺少大規模的制備技術。硫代葡萄糖苷向異硫代氰酸鹽的轉化機理復雜，對轉化條件如何調控缺乏深入研究。也缺少提取和提純技術。蘿卜硫素具有良好的抗癌效果，如果能優化其轉化和提取工藝，大規模提取。使其成為制藥或食品功能成分的中間體，可以促進相關產品開發，將具有廣闊的市場前景。

發明內容

本發明的目的是提供一種從十字花科蔬菜如西蘭花、蘿卜、甘藍和芥菜的種子中提取蘿卜硫素的方法。

通過對加水量、原料預處理、調節水解pH值、酶解溫度、酶解時間、超聲時間、硅膠柱層析洗脫劑選擇、Sephadex?LH-20層析洗脫劑選擇等技術，優化蘿卜硫素的形成和提取工藝，實現大規模生產。

本發明提取工藝如下：

(1)用西蘭花種子為原料，將其粉碎后按重量計加2～3倍量水，調節pH3.8～4.2，

在20～30℃條件下水解7～9小時；

(2)將水解后的西蘭花種子原液冷凍干燥成粉狀；

(3)在粉狀水解物中按重量計加15～25倍量丙酮溶劑，超聲浸提40～80分鐘，抽

濾或雙層紗布過濾；

(4)將濾液于30～50℃條件下真空濃縮獲蘿卜硫素粗品；

(5)將蘿卜硫素粗品經硅膠柱層析，采用正己烷丙酮溶液梯度洗脫，薄層色譜或

HPLC檢測確定含蘿卜硫素的餾分，30～50℃條件下真空濃縮；

(6)將上述真空濃縮的蘿卜硫素用少量丙酮溶解后，用Sephadcx?LH-20柱層析，

用丙酮為洗脫劑，薄層色譜或HPLC檢測確定并收集含蘿卜硫素液體，再經30～

50℃真空濃縮，獲蘿卜硫素產品。

步驟(5)所述正己烷丙酮溶液梯度洗脫的具體配方為：按體積比，正己烷∶丙酮分??別為5∶5，4∶6，3∶7，2∶8。

步驟(1)的水解溶液中，按每公斤原料計加入0.02克抗壞血酸。

步驟(3)所述的超聲浸提的條件是：頻率40khz，功率200W，開70％檔。

上述步驟歸納如下：

西蘭花種子粉碎后加水1∶2-1∶3倍量，加鹽酸調pH3.8-pH4.2，于20℃-30℃室溫下水解7h?9h，冷凍干燥后加15-25倍丙酮溶劑超聲浸提40min-80min，抽濾或雙層紗布過濾，30℃50℃真空濃縮濾液獲粗產品；硅膠柱層析(洗脫梯度為正己烷∶丙酮(v/v)＝5∶5，4∶6，3∶7,2∶8)，收集含蘿卜硫素液體(薄層色譜或HPLC檢測確定)，30℃-50℃真空濃縮濾液，少量丙酮溶解后Sephadex?LH-20柱層析(丙酮為洗脫劑)，收集含蘿卜硫素液體(薄層色譜或HPLC檢測確定)，30℃-50℃真空濃縮濾液獲蘿卜硫素產品。