[發明專利]半定量表達序列標簽擴增多態性的分子標記及其分析方法

無效

• 申請號: 200710150328.1
• 申請日: 2007-11-22
• 公開（公告）號: CN101225438A
• 公開（公告）日: 2008-07-23
• 發明（設計）人: 張伯禮;王慶浩;康立源;張萌;盧全生;陳愛華
• 申請（專利權）人: 天津中醫藥大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司
• 代理人: 王來佳

1.一種半定量表達序列標簽擴增多態性的分子標記，其特征在于：是根據目標表達序列標簽設計固定引物，以CACGC為核心序列設計隨機引物，通過反轉錄聚合酶鏈式反應而得到特定表達序列標簽多態性。

2.根據權利要求1所述的半定量表達序列標簽擴增多態性的分子標記，其特征在于：所述的固定引物的序列如下：

E1：5’ATTCAGCCGATTGCAAGAGA?3’/CV171606

E2：5’TATCTTGACCAGGCGAGACCT?3’/CV171904。

3.根據權利要求1所述的半定量表達序列標簽擴增多態性的分子標記，其特征在于：所述的隨機引物的序列如下：

C1：5’GACTGCGTACGCACGCTGA?3’

C2：5’GACTGCGTACGCACGCTGA?3’

C3：5’GACTGCGTACGCACGC?AAC3’。

4.一種如權利要求1所述的半定量表達序列標簽擴增多態性的分子標記的分析方法，其特征在于：分析方法包括以下步驟：

(1).確定目標EST；

(2).在基因庫的EST庫查詢目標EST序列；

(3).根據目標EST序列設計固定引物和隨機引物；

(4).合成引物：應用DNA合成儀合成設計好的固定引物和隨機引物引物；

(5).RNA的提取；

(6).RT-PCR擴增：應用oligod(T)做引物，對RNA進行反轉錄合成cDNA，

應用固定引物和隨機引物，對cDNA進行PCR擴增；

(7).擴增產物的檢測：PCR擴增產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳；數據分析：

銀染以顯示擴增條帶，應用數據分析軟件進行分析。

5.根據權利要求4所述的半定量表達序列標簽擴增多態性的分子標記的分析方法，其特征在于：所述的隨機引物和固定引物的組合為：

C1/E1，C1/E2；C2/E1；C2/E2，C3/E1，C3/E2。