[發明專利]一種酪蛋白磷酸化的方法

無效

• 申請號: 200710150129.0
• 申請日: 2007-11-09
• 公開（公告）號: CN101182347A
• 公開（公告）日: 2008-05-21
• 發明（設計）人: 張坤生;康鵬;任云霞
• 申請（專利權）人: 天津商業大學
• 主分類號: C07K1/107
• 分類號: C07K1/107
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司
• 代理人: 肖莉麗

1.一種酪蛋白磷酸化的方法，其特征是包括下述步驟：

(1)制備酪蛋白溶液：將干酪素溶解于磷酸鹽緩沖液中，在40℃攪拌至完全溶解，之后進行真空抽濾，去掉干酪素中的固體雜質及未溶的蛋白質和脂類，得到酪蛋白溶液；

(2)磷酸化：調整酪蛋白溶液的pH值為7.0～9.0，之后在上述堿性酪蛋白溶液中加入質量體積百分比濃度為3％～5％的三聚磷酸鈉溶液，在30℃～50℃恒溫2-4小時進行磷酸化反應，之后冷卻到室溫；溶液中酪蛋白與三聚磷酸鈉的質量比為1∶3～5；

(3)純化：調節磷酸化后的酪蛋白溶液的pH值至中性，用真空纖維膜進行透析，收集酪蛋白溶液，再將上述溶液冷凍干燥，得棉花狀的白色的磷酸化酪蛋白。

2.根據權利要求1所述的酪蛋白磷酸化的方法，其特征是所述磷酸鹽緩沖液由磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉配置而成，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.2mol/L、pH值為7。

3.根據權利要求1所述的酪蛋白磷酸化的方法，其特征是步驟(2)中調整酪蛋白溶液的pH值為7.0～9.0時所用溶液為稀氫氧化鈉溶液，步驟(3)所用調節磷酸化后的酪蛋白溶液的pH值至中性所用溶液為稀鹽酸溶液。

4.根據權利要求1所述的酪蛋白磷酸化的方法，其特征是酪蛋白溶液進行冷凍干燥的溫度為-50℃，壓強為500-600Pa，時間為24小時，使用鋼制托盤進行冷凍干燥。

5.根據權利要求1所述的酪蛋白磷酸化的方法，其特征是透析過程中選用6000-8000D的真空纖維膜；每隔兩小時換一次水，并用質量體積比濃度為1％的氯化鋇溶液檢驗透析溶液中小分子量離子的含量。

6.根據權利要求1所述的酪蛋白磷酸化的方法，其特征是干酪素與磷酸鹽緩沖液的重量/體積比為1∶100～150。