[發明專利]生產具有預定的翻譯后修飾的蛋白質的方法和手段

有效

• 申請號: 200710149498.8
• 申請日: 2002-10-29
• 公開（公告）號: CN101177700A
• 公開（公告）日: 2008-05-14
• 發明（設計）人: 迪爾克·揚·埃爾貝特斯·奧普斯泰爾滕;約翰·克里斯蒂安·卡普坦;彼德魯斯·克里斯蒂安納斯·約翰內斯·約瑟夫斯·帕西耶;羅納德·亨德里克·彼得·布魯斯;亞伯拉罕·布特
• 申請（專利權）人: 克魯塞爾荷蘭公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12N5/06;C12N15/861;G01N33/68;C07K14/505;C07K16/00
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 林曉紅

1.一種選擇能生產包含預定翻譯后修飾的蛋白質分子的哺乳動物細胞的方法，所述方法包括以下步驟：

a)分析所述哺乳動物細胞中或所述哺乳動物細胞表面上組織特異性標記或者組織特異性標記組合的存在與否，所述標記或標記組合是所述蛋白質分子上存在所述預定翻譯后修飾的指征；

b)基于所述組織特異性標記的存在與否選擇所述哺乳動物細胞。

2.權利要求1的方法，其中所述預定翻譯后修飾包括糖基化。

3.權利要求2的方法，其中所述糖基化包括至少一個修飾，所述修飾選自：Lewis?x、唾液酸Lewis?x、GalNac結構、GlcNac結構、LacdiNAc結構、附著于N-乙酰葡糖胺上的α1，3-連接的巖藻糖、末端N-乙酰葡糖胺、末端半乳糖、等分N-乙酰葡糖胺、硫酸基團和唾液酸。

4.權利要求3的方法，其中所述糖基化包括Lewis?x和/或唾液酸Lewis?x結構。

5.一種從異質細胞群中獲得哺乳動物細胞的方法，所述哺乳動物細胞能生產包含Lewis?x和/或唾液酸Lewis?x結構的蛋白質分子，所述方法包括以下步驟：

a)在所述異質細胞群中基于所述細胞生產的蛋白質上的Lewis?x和/或唾液酸Lewis?x結構淘選細胞；

b)選擇能生產包含所述Lewis?x和/或唾液酸Lewis?x結構的蛋白質的細胞。

6.權利要求1-5任一項的方法，其中所述哺乳動物細胞是神經來源的。

7.權利要求1-5任一項的方法，其中所述哺乳動物細胞是人細胞。

8.權利要求1-5任一項的方法，其中所述哺乳動物細胞具有編碼人腺病毒E1區域或其一部分的核酸，從而所述哺乳動物細胞攜帶可表達形式的所述核酸。

9.一種在哺乳動物細胞中生產包含預定翻譯后修飾的蛋白質分子的方法，所述方法包含通過權利要求1-8任一項的方法鑒別和/或選擇和/或獲得所述哺乳動物細胞，并在所述哺乳動物細胞中表達所述蛋白質分子的步驟。

10.權利要求9的方法，其中所述哺乳動物細胞保藏在歐洲動物細胞保藏中心的應用微生物學和研究中心(the?Center?for?AppliedMicrobiology?and?Research)，保藏號96022940。

11.權利要求10的方法，其包括從所述哺乳動物細胞培養物中純化所述蛋白質分子的額外步驟。

12.權利要求11的方法，其中所述純化包括利用所述預定翻譯后修飾的步驟。

13.權利要求12的方法，其中所述純化包括一個步驟，其中利用特異于所述預定翻譯后修飾中存在的表位的一種抗體。

14.權利要求13的方法，其中所述純化包括凝集素結合步驟。

15.權利要求12-14任一項的方法，其中所述蛋白質分子是促紅細胞生成素。