[發明專利]一種從橡膠樹中分離培養單細胞綠藻的方法

無效

• 申請號: 200710149343.4
• 申請日: 2007-08-30
• 公開（公告）號: CN101139551A
• 公開（公告）日: 2008-03-12
• 發明（設計）人: 張家明;孫雪飄;龐道標;譚德冠
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12
• 代理公司: 海口翔翔專利事務有限公司
• 代理人: 莫臻

技術領域

本發明涉及一種植物的分離、培養方法。尤其涉及一種與橡膠樹共生的單細胞綠藻的分離培養方法。

背景技術

天然橡膠在國家安全和經濟建設中具有重要的戰略地位，是關系國計民生的戰略物資。我國的天然橡膠產業是在20世紀50年代初建立和發展起來的，到上世紀90年代，我國天然橡膠自給率達到50％。然而，由于汽車工業的發展，近年來，我國對天然橡膠的需求以年均20％的速度急劇增長，2003年達到172萬噸，雖然2003年，我國橡膠種植面積增加到950萬畝(63萬公頃)，干膠總產增至56萬噸，缺口反而增加到116萬噸，自給率下降到32.6％，已低于我國在2002年農業部頒布的《“十五”期間我國天然橡膠和熱作產業的發展目標和措施》中提出的“確保天然橡膠半自給”的目標。目前，我國已成為天然橡膠的第一大消費國。到2015年，我國天然橡膠的消費量可能達到350～400萬噸，如果產量不能提高，我國天然橡膠的自給率可能低于20％。嚴重威脅國防和經濟安全。因此，提高橡膠產量仍是我國橡膠產業緊迫任務。然而，天然橡膠產業具有較高的地域要求，我國橡膠樹種植面積擴大的潛力很有限。因此，提高橡膠單產是我國天然橡膠產業發展的唯一出路。

茉莉酸是一種植物內源生長調節物質，在植物的生長發育和增強植物抗性方面具有重要作用。近年來我國科學家的研究發現外源茉莉酸類物質特異性誘導橡膠樹次生乳管分化，顯著提高膠乳產量，然而，由于茉莉酸極其昂貴，直接用來噴涂橡膠樹成本太高。探索促進乳管分化的茉莉酸替代物是解決問題的方法之一，但目前還沒有進展。

發明內容

本發明的目的是提供一種從橡膠樹中分離、培養單細胞綠藻的方法。

本發明所提供的從橡膠樹中分離、培養單細胞綠藻的方法包括橡膠樹芽條的選取與處理過程、綠藻的分離培養過程。

芽條的選取與處理過程：取橡膠樹枝條或芽條，去掉葉片，切為小段，用乙醇溶液浸泡，再用升汞溶液或次氯酸鈉溶液進行滅菌，接著用無菌水洗滌干凈。

綠藻的分離培養過程：將處理好的莖段縱向剖開，接種在誘導培養基上，誘導綠藻的生長。所述誘導培養基是以MS為基本培養基，添加蔗糖。還可以根據需要添加植物激素BA、IAA、KT、IBA。

綠藻能與其它生物共生是廣為人知的自然現象。最著名的例子是由一種單細胞綠藻和一種真菌共生而形成的地衣(lichen)，其中，綠藻為真菌提供光合作用產物，而真菌為綠藻提供保護。小球藻與水蛭的共生也是得到深入研究的例子。小球藻依附在水蛭的腸道細胞內，在水蛭饑餓的時候，可以提供水蛭69％的能量；而在黑暗的日子里，水蛭反過來提供小球藻能量。

本發明所提供的從橡膠樹中分離培養單細胞綠藻的方法工藝簡單，涉及的綠藻是從橡膠樹分離出來，是目前唯一從橡膠樹中分離的單細胞綠藻。該藻細胞呈圓球狀，直徑3.8-8.7μm，與已知的綠藻在顯微、超顯微結構以及DNA序列上存在顯著差異，分子系統進化分析結果表明該藻為一新種，代表一個新的屬，現已經被命名為海南橡膠藻(Heveochlorella?hainangensis?Zhang)。該綠藻可用于表達外源基因，能用于提供橡膠樹膠乳產量，同時還具有凝固膠乳的作用，用于膠園生物凝固膠乳，從而降低生產成本，減少環境污染。

附圖說明

圖1是本發明所提供的綠藻的光學顯微照片。

圖2是本發明所提供的綠藻的整個細胞的透射電鏡照片。

圖3是本發明所提供的綠藻的一個淀粉核的透射電鏡放大照片。

圖4是本發明所提供的綠藻建立在18S?rDNA序列基礎上的分子進化樹。

圖5是本發明所提供的綠藻建立在16S?rDNA序列基礎上的分子進化樹。

具體實施方式

下面對本發明作進一步說明。

本發明所提供的一種從橡膠樹中分離培養單細胞綠藻的方法包括芽條的選取與處理過程、綠藻的分離培養過程。

1、芽條的選取與處理過程：取橡膠樹枝條或芽條，去掉葉片，切為0.5-1厘米長度的小段，然后用50-80％乙醇溶液浸泡10-60秒，再用0.1-0.2％升汞溶液進行浸泡滅菌6-12分鐘，或用5-10％次氯酸鈉溶液進行浸泡滅菌10-20分鐘，接著用無菌水洗滌3-6次。