[發明專利]H5亞型禽流感病毒中和表位模擬肽及其用途

無效

• 申請號: 200710129838.0
• 申請日: 2007-07-27
• 公開（公告）號: CN101353371A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發明（設計）人: 羅文新;陳瑛煒;王明橋;陳毅歆;張軍;夏寧邵
• 申請（專利權）人: 廈門大學;養生堂有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12N15/11;A61K39/00;G01N33/53;G01N33/577;C07K16/18
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 胡國群

發明領域

本發明涉及H5亞型禽流感病毒中和表位模擬肽，及其保守性變異體或活性片段，或模擬肽及其類似物的相關編碼序列，及應用該模擬肽或類似物于預防或診斷的用途。

背景技術

自H5型禽流感于1996年首先在我國廣東省農場的鵝群暴發以來(Xu?X?et?al.，1999，Virology)，由此病毒演生出來的另一株H5病毒在香港的禽鳥農場(1997年4月)及市場(1997年11月)暴發，引起了歷史上禽流感病毒第一次直接由禽傳人事件，前后共18例確診病例中有6人死亡。2003年以來，H5病毒株在整個東亞及東南亞國家的相繼暴發，WHO及流感專家預測H5禽流感病毒將最有可能成為下一次人類大流感暴發的流行株。2004年初，H5型高致病性禽流感也先后在我國十幾個省暴發，并在中國香港、泰國、荷蘭等發現H5型禽流感傳染雞、鴨、蒼鷺、虎、貓等多種動物的事件。更令人擔憂的是，在泰國已經出現疑似人傳染人事件，馬來西亞也有多例報道。進入2005年，羅馬尼亞、俄羅斯、土耳其等歐洲國家相繼發現禽類感染H5型禽流感病毒致死事件，專家認為此乃帶毒候鳥遷移的結果，這使得控制高致病性H5型禽流感病毒的進一步擴散傳播變得更為困難。專家預測，隨著侯鳥的傳播，H5型禽流感病毒有可能通過歐亞、亞非大陸橋進一步傳播到衛生條件極差的非洲國家，使得H5型禽流感病毒獲得和其它人流感病毒充分重組的機會和時間，屆時將很可能形成一種對人類高度致命的全新流感病毒，其給人類帶來的各種損失將難以估計。根據WHO統計結果，截止2006年1月19日，全球因感染H5N1病毒死亡的人類個案已達80例，給全球公共衛生安全帶來極大的考驗。

最新研究結果(Li，K.S.et?al.，2004，Nature)表明，華南水禽(家鴨)為H5型禽流感病毒的主要攜帶者及傳播者，H5型禽流感的爆發有明顯的季節性，并伴隨著生物多態型(多種基因型)的演變。然而，分子流行病學研究表明，目前鴨群中大約有30％的陽性感染并無任何癥狀，雞群中也有達10％的流行且無癥狀帶毒。這些受感染的動物又能夠不斷使人受到新的感染，對人類的健康構成巨大的威脅。有關專家一致認為要控制好H5型高致病性禽流感病毒在整個東亞、東南亞以及歐洲各國的流行，早期診斷是先決條件，然后才能做到早隔離、早處理，對人做到早治療。

由于H5型禽流感病毒(其中Goose/Guangdong/1/96為代表株)屬高致病性病毒，對目前常用的動物模型均有致死性，而采用基因工程方法表達的血凝素蛋白(HA)又不能完整取得抗原性，世界上多個著名實驗室先后嘗試制備針對該病毒系的單克隆抗體均未獲成功。目前對該病毒抗原性分析不得不采用特異性及反應性均明顯達不到診斷試劑要求的由A/chicken/Pennsylvania/1370/83(H5N2)和A/chicken/Pennsylvania/8125/83(H5N2)制備的單克隆抗體。

本實驗室利用不同時間、不同地點、不同宿主分離到的多個禽流感病毒H5N1代表株免疫小鼠，持續進行單克隆抗體的制備，已制備出了包含388株具有血凝抑制(HI)活性的H5特異性單克隆抗體的H5單抗庫。

根據對近千株全球各地H5N1病毒基因組序列進行的系統進化分析，我們篩選出34株不同地域、不同進化分支、不同宿主來源的H5N1代表株，加上2006年最新分離出的7個毒株共41個毒株組成代表性H5N1病毒庫。對這41株H5N1病毒進行各單抗的HI活性測定，可根據HI活性的差異將這388株單抗分為10個類型，同時可將這41株代表性病毒分為八個HI活性分支。初步篩選出69株對60％以上病毒株有強反應(HI滴度大于1600)的單抗，對34株H5N1代表株進行病毒微量中和實驗，證實這些單抗均可對數目不同的毒株具有不同程度的中和活性，為治療性抗體研究奠定了基礎。

血凝素(HA)抗原是禽流感病毒疫苗的最主要靶標，但同時也是病毒變異最活躍的抗原。現有流感疫苗必須不斷根據最新的病毒流行株的抗原變異特征的變化而更新用于疫苗制備的毒株，而且由于各地流行病毒株并不一定完全一致，造成疫苗株選擇的巨大困難。同時，由于新疫苗的制備必須經一定的時間，為應對流感疫情，必須提前對病毒流行趨勢進行預測，這種預測也不能保證每次都正確。因此，發現禽流感病毒高保守中和表位并進行針對性的通用疫苗研究開發具有極大的吸引力。