[發明專利]肺炎嗜衣原體的一種重組主要外膜蛋白及其制備方法

無效

• 申請號: 200710129792.2
• 申請日: 2007-07-27
• 公開（公告）號: CN101113166A
• 公開（公告）日: 2008-01-30
• 發明（設計）人: 端青;李巖偉;朱虹;宋立華;何君;檀華;左庭婷
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C07K14/295
• 分類號: C07K14/295;A61K39/118;A61P31/04;C12N15/31;C12N15/63
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1.肺炎嗜衣原體的一種重組主要外膜蛋白，是具有序列表中序列2氨基酸殘基序列的蛋 白質，或者是將序列2的氨基酸殘基序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具 有與序列2的氨基酸殘基序列相同活性的由序列2衍生的蛋白質。

2.根據權利要求1所述的蛋白，其特征在于：??它是具有序列表中序列2氨基酸殘基序列 的蛋白質。

3.肺炎嗜衣原體一種重組主要外膜蛋白的編碼基因，是下列核苷酸序列之一：

1)序列表中序列1的DNA序列；

2)與序列表中序列1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質 的DNA序列。

4.根據權利要求3所述的基因，其特征在于：所述肺炎嗜衣原體重組主要外膜蛋白的編碼 基因是序列表中序列1的DNA序列。

5.含有權利要求3所述基因的表達載體。

6.含有權利要求3所述基因的細胞系。

7.肺炎嗜衣原體一種重組主要外膜蛋白的制備方法，包括以下步驟：

1)擴增序列1中的基因；

2)將目的片段與載體相連轉入大腸桿菌；

3)誘導表達得到目的蛋白；

4)重組主要外膜蛋白的純化和復性。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：擴增序列主要外膜蛋白基因所用的引物 是，上游引物5’catgccatggctttgcctgtagggaac3’，下游引物5’gctgtcgacttagaatctgaactgacc3′；所述 將目的片段與載體相連轉入大腸桿菌；提取質粒后，轉入表達型菌體；誘導表達得到肺炎 嗜衣原體重組主要外膜蛋白的具體步驟是將目的片段從T載體上切下，與經相同酶切的 pET32a載體相連，轉入表達型菌體BL21(DE3)，挑取陽性菌落培養，經IPTG誘導表達得到目 的蛋白；所述重組主要外膜蛋白的純化和復性的具體步驟是用超聲緩沖液(50mM?NaH₂PO₄， 300mM?NaCl)超聲破菌收集包涵體，經0.02M?Tris-HCl(pH8.0)緩沖液洗滌后用8M尿素 進行變性，后經尿素濃度梯度透析進行復性。