[發明專利]組織工程化角膜上皮移植膜及其制備方法和應用有效
| 申請號： | 200710129136.2 | 申請日： | 2007-07-13 |
| 公開（公告）號： | CN101306207A | 公開（公告）日： | 2008-11-19 |
| 發明（設計）人： | 許永根;王薇 | 申請（專利權）人： | 北京大學第三醫院 |
| 主分類號： | A61L27/38 | 分類號： | A61L27/38;A61L27/36;A61F2/14 |
| 代理公司： | 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 | 代理人： | 程泳 |
| 地址： | 100083*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 組織 工程 角膜 上皮 移植 及其 制備 方法 應用 | ||
【權利要求書】：
1.制備組織工程化角膜上皮移植膜的方法，包括：
1)取人角膜緣組織利用植塊培養法在體外原代培養、傳代培養人 角膜上皮細胞；
2)選擇具有角膜上皮細胞特異性的原代培養、傳代培養人角膜上 皮細胞；
3)構建組織工程角膜支架材料；和
4)將步驟1)和2)所得體外培養的人角膜上皮細胞種接種于步驟 3)所得組織工程角膜支架上，共同在體外培養，最終得到組織工程化 角膜上皮移植膜；
其中步驟1)中在體外培養人角膜上皮細胞的方法包括：
(1)在角膜緣取角膜緣組織塊，并用含有1％青霉素-鏈霉素的 D-PBS緩沖液沖洗；
(2)于中性蛋白酶，優選dispase?II消化液中4℃下放置過夜，然 后D-PBS緩沖液沖洗；
(3)再用0.25％胰蛋白酶-EDTA在37℃處理10分鐘，于含10％FBS DMEM培養液中中和胰酶；
(4)待置于培養皿中的經上述處理的角膜緣組織塊完全貼壁后， 在含10％FBS?DMEM培養液中37℃5％二氧化碳培養箱里培養；
其中步驟3)所述組織工程角膜支架材料為無抗原性或抗原性較低 的人源或非人源脫細胞角膜基質。
2.根據權利要求1所述的方法，其中所述脫細胞角膜基質是豬脫 細胞角膜基質或狗脫細胞角膜基質。
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