[發明專利]α-葡萄糖苷酶及其基因和制備方法以及載體和宿主細胞

有效

• 申請號: 200710121922.8
• 申請日: 2007-09-18
• 公開（公告）號: CN101392242A
• 公開（公告）日: 2009-03-25
• 發明（設計）人: 馬延和;周成;薛燕芬
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N9/26
• 分類號: C12N9/26;C12N15/56;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司
• 代理人: 王鳳桐;周建秋

1.一種α-葡萄糖苷酶，該α-葡萄糖苷酶的氨基酸序列如SEQ?ID：NO. 2所示。

2.編碼權利要求1所述的α-葡萄糖苷酶的基因。

3.根據權利要求2所述的基因，該基因的核苷酸序列如SEQ?ID：NO.1 所示。

4.一種重組載體，該重組載體含有權利要求2或3所述的基因。

5.根據權利要求4所述的重組載體，其中，該重組載體為重組質粒。

6.根據權利要求5所述的重組載體，其中，該重組載體為pGEM-TGlu 或pETGlu，所述pGEM-TGlu是通過將pGEM-T?Easy載體與加polyA尾的 PCR產物連接得到的，其中PCR產物是由正向引物：5’-CCTAGCTAGCA TGTGGTGGAAAGAG-3’和反向引物：5’-GCCCAAGCTTCTAGTCTAGC CGCAC-3’擴增SEQ?ID?NO.1所示的α-葡萄糖苷酶基因得到的；所述 pETGlu是通過將目的插入片段與質粒pET28a經過Nhe?I和Hind?III雙酶切 得到的酶切片段連接得到的；其中目的插入片段是將pGEM-TGlu經過Nhe?I 和Hind?III雙酶切得到的含有SEQ?ID?NO.1所示的α-葡萄糖苷酶基因的片 段。

7.一種重組宿主細胞，該重組宿主細胞含有權利要求4所述的重組載 體。

8.根據權利要求7所述的重組宿主細胞，所述宿主細胞為大腸桿菌。

9.根據權利要求8所述的重組宿主細胞，所述大腸桿菌為大腸桿菌 DH5α或大腸桿菌BL21(DE3)。

10.根據權利要求9所述的重組宿主細胞，該重組宿主細胞為保藏編號 為CGMCC?No.2052的重組大腸桿菌DH5αpGEM-TGlu。

11.一種α-葡萄糖苷酶的制備方法，該方法包括培養權利要求7-10中 任意一項所述的重組宿主細胞。