[發(fā)明專利]豬繁殖與呼吸綜合癥病毒毒株及由其制備的滅活疫苗

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710121202.1
• 申請(qǐng)日: 2007-08-31
• 公開（公告）號(hào): CN101376878A
• 公開（公告）日: 2009-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 冷雪;溫永俊;齊巧玲;譚斌;武華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京健翔和牧生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/00
• 分類號(hào): C12N7/00;C12N7/04;C12N15/33;A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 孫皓晨

1.豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine?Reproductive?and?RespiratorySyndrome?Virus)TJ株，其微生物保藏號(hào)是：CGMCC?NO.2129。

2.一種制備預(yù)防豬繁殖與呼吸綜合征的滅活疫苗的方法，包括：將權(quán)利要求1的豬繁殖與呼吸綜合征病毒TJ株進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，收獲病毒液，將病毒液滅活后制成水相，將水相與油相乳化后，即得。

3.按照權(quán)利要求2的方法，其特征在于，所述的病毒液按照下述方法制備：培養(yǎng)Marc-145細(xì)胞；將權(quán)利要求1的豬繁殖與呼吸綜合征病毒TJ株經(jīng)連續(xù)傳代和多次噬斑克隆純化后以感染劑量接種到Marc-145細(xì)胞上進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，收獲病毒液。

4.按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于：將權(quán)利要求1的豬繁殖與呼吸綜合征病毒TJ株經(jīng)連續(xù)傳代和多次噬斑克隆純化后以感染劑量0.01-0.5接種到Marc-145細(xì)胞上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)3-5天，當(dāng)細(xì)胞病變達(dá)到80％時(shí)收獲病毒液。

5.按照權(quán)利要求3的方法，其特征在于，所述的Marc-145細(xì)胞按照以下任意一種方法培養(yǎng)得到：(1)在轉(zhuǎn)瓶中培養(yǎng)Marc-145細(xì)胞，使Marc-145細(xì)胞密度達(dá)到5-10×10⁷/ml；(2)在生物反應(yīng)器中添加附著載體的懸浮培養(yǎng)或無載體的懸浮培養(yǎng)，使Marc-145細(xì)胞密度達(dá)到5-10×10⁷/ml；(3)將Marc-145細(xì)胞在無血清或1-5％的低濃度血清中懸浮培養(yǎng)。

6.按照權(quán)利要求2的方法，其特征在于，所述的油相按照以下方法制備：向65-90體積份注射用白油中加入5-15體積份司班80和5-25體積份吐溫80，隨加隨攪拌至透明為止，滅菌后，備用。

7.按照權(quán)利要求2的方法，其特征在于，所述的乳化包括以下步驟：取水相放于乳化缸內(nèi)，慢速轉(zhuǎn)動(dòng)攪拌，同時(shí)徐徐加入油相，加完后再以10000r/min～15000r/min攪拌10～30分鐘，在終止攪拌前加入10％硫柳汞溶液，使其最終濃度為0.01％。

8.按照權(quán)利要求2的方法，其特征在于，所述的病毒液滅活方法是：向病毒液中加入二乙烯亞胺至其終濃度為1mM-3mM，在37℃條件下滅活4-28h；病毒液滅活后再用硫代硫酸鈉中和。

9.豬繁殖與呼吸綜合征病毒的滅活疫苗，其特癥在于：由權(quán)利要求2-8任何一項(xiàng)方法所制備得到。