[發(fā)明專利]與板栗疫病菌的DNA打靶效率相關(guān)的蛋白及其編碼基因與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710120156.3
• 申請(qǐng)日: 2007-08-10
• 公開（公告）號(hào): CN101130570A
• 公開（公告）日: 2008-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳保善;藍(lán)秀萬(wàn);姚姿婷;商巾杰;林海燕;周燕;范云燕;何小丹;陳敏玫;陳美佳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/415
• 分類號(hào): C07K14/415;C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及與板栗疫病菌的DNA打靶效率相關(guān)的蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。

背景技術(shù)

板栗疫病又稱干枯病、胴枯病、潰瘍病，是世界性病害。歷史上曾在亞洲流行過(guò)，20世紀(jì)初曾使歐洲栗和美洲栗幾遭覆滅。我國(guó)的陜西、河北、河南、山東、安徽、江蘇、浙江、湖南、廣東等省都有發(fā)生，局部地方發(fā)病率高達(dá)60％。病株生勢(shì)衰弱，栗果產(chǎn)量、質(zhì)量明顯下降，嚴(yán)重的全株死亡，是我國(guó)對(duì)內(nèi)外檢疫對(duì)象之一。

板栗疫病菌(Cryphonectria?parasitica)是引起板栗疫病的病原真菌，屬子囊菌亞門(Griffin?G.1986.Chestnut?blight?and?its?control.Horticultural?reviews.8：291-335.)。

要明確板栗疫病發(fā)病機(jī)制，首先要了解板栗疫病菌的基因功能，基因的功能決定了該菌的致病性、發(fā)病機(jī)制、耐藥性等性狀。

基因打靶是利用基因轉(zhuǎn)移的方法，將外源基因引入細(xì)胞，通過(guò)外源基因與靶細(xì)胞染色體DNA序列間的重組，將外源基因定位整合入靶細(xì)胞染色體上的特定部位，使基因發(fā)生定位突變的技術(shù)。定位突變包括：基因缺失、基因置換、基因插入和點(diǎn)突變等?；虼虬惺够蚴Щ罨蚴够蚣せ?。其中，通過(guò)基因打靶使目標(biāo)基因缺失或分裂失活，也稱為基因敲除(gene?knock-out)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種與板栗疫病菌的DNA打靶(如基因打靶)效率相關(guān)的蛋白及其編碼基因。

本發(fā)明所提供的與板栗疫病菌的DNA打靶效率相關(guān)的蛋白，名稱為CPKU80，來(lái)源于板栗疫病菌(Cryphonectria?parasitica)，是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

(b)將序列表中序列1的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與板栗疫病菌的DNA打靶效率相關(guān)的由(a)衍生的蛋白質(zhì)。

其中，序列表中的序列1由729個(gè)氨基酸殘基組成。自氨基末端第4至166位氨基酸殘基為Ku70/Ku80N-端結(jié)構(gòu)域(vWA_ku)，自氨基末端第223至562位氨基酸殘基為Ku-核心結(jié)構(gòu)域(KU80)，自氨基末端第604至726位氨基酸殘基為Ku?C-端結(jié)構(gòu)域(Ku_PK_bind)，與粗糙脈孢菌(Neurospora?crassa)MUS52(Ninomiya，Y.，K.Suzuki，C.Ishii?and?H.Inoue，2004Highly?efficient?gene?replacements?in?Neurospora?strains?deficient?fornonhomologous?end-joining.Proc.Natl.Acad.Sci.USA?101：12248-12253.)在氨基酸水平上的一致性為47.0％，相似性64.0％。

所述一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加是指在序列1的上述三個(gè)結(jié)構(gòu)域外進(jìn)行取代和/或缺失和/或添加。

為了使(a)中的CPKU80便于純化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的N端或C端連接上如表1所示的標(biāo)簽。

表1.標(biāo)簽的序列