[發明專利]一種在醫療器械表面固定抗體的方法

有效

• 申請號: 200710107643.6
• 申請日: 2007-05-23
• 公開（公告）號: CN101310778A
• 公開（公告）日: 2008-11-26
• 發明（設計）人: 余占江;蒲忠杰
• 申請（專利權）人: 樂普（北京）醫療器械股份有限公司
• 主分類號: A61L27/54
• 分類號: A61L27/54;A61L27/28;A61L31/16;A61L31/08
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司
• 代理人: 練光東

1.一種在醫療器械表面固定抗體的方法，主要包括①器械本體表面的預處理、②制備孔洞、③器械本體表面的后處理、④固定抗體工藝步驟，其特征在于所述的②制備孔洞是采用化學腐蝕、電化學腐蝕、陽極氧化、微弧氧化或微弧氮化方法在器械本體表面制備大小均一的400～600nm的孔洞；所述的③器械本體表面的后處理是將上述處理好的器械本體材料先使用濃度為99.5％的丙酮分析純溶液，再經蒸餾水利用頻率為28～100khz超聲波清洗本體材料5～15min；最后將清洗后的本體材料放置在干燥機中，溫度設定在30～40℃，干燥30～60min后取出備用；或用蒸餾水配制濃度為1～38％的鹽酸溶液，將本體材料浸泡在配好的溶液中，放置在恒溫箱中，溫度設定在20℃左右，放置30min～48h取出；所述的④固定抗體是將表面帶有孔洞的器械本體浸沒在含有生物制品抗體的溶液中，調節抗體緩沖液的pH值使抗體溶液帶正電荷，通過正負電荷相吸將生物制品抗體固定在器械本體表面。

2.根據權利要求1所述的一種在醫療器械表面固定抗體的方法，其特征在于所述的①器械本體表面的預處理：利用超聲波對器械本體表面清洗清除雜質，使用濃度為99.5％的丙酮分析純溶液，或濃度為75％的醫用乙醇溶劑，利用頻率為28～100khz超聲波清洗支架本體材料，清洗5～15min，去除本體表面的雜質，將清洗后的本體材料放置在干燥機中，溫度設定在30～40℃，干燥30～60min后取出備用。

3.根據權利要求1所述的一種在醫療器械表面固定抗體的方法，其特征在于②制備孔洞：所述化學腐蝕或電化學腐蝕方法是將器械本體材料浸泡在0～100℃溫度的腐蝕液中，腐蝕時間根據濃度、溫度不同控制在1min～480h后形成單尺寸納米級400-600nm的孔洞。

4.根據權利要求3所述的一種在醫療器械表面固定抗體的方法，其特征在于，所述腐蝕液為濃度為1～38％的鹽酸，或含有1～38％的鹽酸混合1～98％的硫酸成分的鹽酸混酸溶液，

5.根據權利要求1所述的一種在醫療器械表面固定抗體的方法，其特征在于所述的器械本體包括外科植入材料或植入硬組織的支架。?

6.根據權利要求5所述的一種在醫療器械表面固定抗體的方法，其特征在于所述支架為球囊擴張型支架、自膨脹型支架、血管支架或非血管支架，基材為不銹鋼、鎳鈦記憶合金、鈷基合金、純鈦或鈦合金的支架。

7.根據權利要求1所述的一種在醫療器械表面固定抗體的方法，其特征在于所述的生物制品抗體包括下述一種或多種物質：肝素、抗血小板膜糖蛋白受體劑拮抗、抗體治癌藥物、阿昔單抗、生物多肽、CD34抗體、CD31抗體或CD133抗體。

8.根據權利要求1所述的一種在醫療器械表面固定抗體的方法，其特征在于所述的④固定抗體：

(1).將表面帶有孔洞的支架浸沒在含有0.1～10μg/ml?CD34抗體磷酸鹽緩沖液溶液中，25～37℃溫育20～30min后取出；

(2).將支架用磷酸鹽緩沖液溶液清洗3次，每次5min，保持室溫向支架吹風15min，待支架干燥后4℃保存；

(3).將表面帶有抗體的支架浸沒在500μl?5％牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液溶液中，25～37℃溫育20～30min后取出支架，空氣中晾干；

(4).將支架放入500μl?0.01ng/μl人重組CD34抗原的磷酸鹽緩沖液溶液中，25～37℃溫育20～30min后取出支架，空氣中晾干；

(5).將支架放入500μl?1μg/ml的異硫氰酸熒光素標記的CD34抗體的磷酸鹽緩沖液溶液，或辣根過氧化物酶標記的山羊抗小鼠的IgG的磷酸鹽緩沖液溶液，25～37℃溫育20～30min后取出支架；

(6).將支架用磷酸鹽緩沖液溶液清洗3次，每次5min后晾干支架。

9.根據權利要求1所述的一種在醫療器械表面固定抗體的方法，其特征在于④固定抗體之后進行⑤抗體活性檢測：采用人工模擬血液流動學和支架表面抗體活性檢測方法驗證固定生物制品抗體的有效性，通過熒光顯微鏡對支架進行熒光照相，或采用3-氨基-9-乙基-咔唑染色試劑盒，免疫組化染色后拍照。